循環(huán)壓力對(duì)體外構(gòu)建組織工程軟骨的影響.pdf

1、目的：探討循環(huán)壓力對(duì)體外構(gòu)建組織工程軟骨的影響，并且對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步研究。 方法：處死新西蘭兔，碘伏消毒。無(wú)菌條件下取四肢關(guān)節(jié)軟骨，將軟骨剪碎至約1mm3大小，再用0.25﹪的胰蛋白酶和0.2﹪的Ⅱ型膠原酶依次消化后獲取軟骨細(xì)胞。體外擴(kuò)增培養(yǎng)至第四代后，收集細(xì)胞。將軟骨細(xì)胞分別接種于PGA無(wú)紡網(wǎng)支架和蓋玻片上，待細(xì)胞充分貼壁后，支架和蓋玻片均被隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組在循環(huán)壓力下培養(yǎng)，對(duì)照組在普通條件下培養(yǎng)。5天后，取出蓋玻片，

2、采用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)兩組軟骨細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度。支架培養(yǎng)4周后，觀察組織工程軟骨的形態(tài)、色澤，采用組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)循環(huán)壓力組和對(duì)照組的組織工程軟骨結(jié)構(gòu)以及Ⅱ型膠原含量。 結(jié)果：循環(huán)壓力下培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞內(nèi)熒光較強(qiáng)，光密度值為(58.90±11.58)，分布具有集中趨勢(shì)。普通培養(yǎng)組熒光較弱，光密度值為(30.70±3.13)，分布均勻。組織學(xué)觀察見循環(huán)壓力下培養(yǎng)的組織工程軟骨細(xì)胞數(shù)量多，呈圓形，排列緊密，軟骨細(xì)胞

3、被大量細(xì)胞外基質(zhì)包圍。Ⅱ型膠原染色面積大(60.67﹪±6.41﹪)。普通條件下培養(yǎng)的組織工程軟骨細(xì)胞數(shù)量少，呈三角形或梭形，排列稀疏，細(xì)胞外基質(zhì)少，Ⅱ型膠原染色面積小(19.92﹪±2.34﹪)。 結(jié)論：循環(huán)壓力能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖和刺激軟骨細(xì)胞合成分泌Ⅱ型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，有利于體外構(gòu)建高質(zhì)量的組織工程軟骨。我們認(rèn)為其作用機(jī)制是：首先促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的增加，鈣離子作為細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使，調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞的增殖和Ⅱ型膠