化學(xué)去細胞異種神經(jīng)復(fù)合NGF、修復(fù)神經(jīng)缺損的實驗研究.pdf

1、目的:用化學(xué)方法去除日本大耳白兔雙側(cè)脛神經(jīng)的雪旺氏細胞及髓鞘，制成去細胞神經(jīng)基膜管，將NGF(神經(jīng)生長因子)與神經(jīng)基膜管復(fù)合，橋接成年wistar大鼠坐骨神經(jīng)10mm神經(jīng)缺損，進一步探索NGF與異種去細胞神經(jīng)基膜管復(fù)合后用于異種移植修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的效果。方法:選用成年日本大耳白兔15只，切取兔雙側(cè)脛神經(jīng)各4cm，隨機抽取15例新鮮神經(jīng)，分別取其中2cm行流式細胞法檢測MHC-Ⅱ類組織相容性抗原，其余2cm行去細胞處理后再行流式細胞法檢

2、測MHC-Ⅱ類抗原及組織學(xué)、電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)，另15例新鮮神經(jīng)分別剪成1cm長度，經(jīng)化學(xué)方法制成去細胞神經(jīng)基膜管，其中15段用4500U/ml的NGF溶液4℃浸泡24小時；另15段置于無菌PBS緩沖液中4℃保存?zhèn)溆茫桓鶕?jù)移植物的不同，將Wistar大鼠隨機分為3組，每組15只：實驗組(A組)：去細胞異種神經(jīng)基膜管復(fù)合NGF移植組、對照組Ⅰ(B組)：去細胞異種神經(jīng)基膜管移植組、對照組Ⅱ(C組)：自體神經(jīng)移植組。分籠喂養(yǎng)，術(shù)后1個月行神經(jīng)

3、電生理檢測，包括脛后肌群運動誘發(fā)電位，再生神經(jīng)的傳導(dǎo)速度；用HE染色，免疫組化染色，透射電鏡等方法對移植段遠端吻合口再生神經(jīng)纖維進行形態(tài)學(xué)觀察，并對再生有髓神經(jīng)纖維的數(shù)量、密度、直徑及雪旺氏細胞的密度進行量化分析。結(jié)果:移植前新鮮神經(jīng)組MHC-Ⅱ類抗原檢測值為72.14±19.88，去細胞組MHC-Ⅱ類抗原檢測值為4.19±3.11，兩組比較存在顯著性差異(P＜0.05)，透射電鏡觀察顯示為膠原性管道，無細胞成分；術(shù)后1個月，3組動物行

4、走均有不同程度的恢復(fù)，處死前行運動誘發(fā)電位檢測，A組的神經(jīng)傳導(dǎo)速度為21.16±2.31，B組的神經(jīng)傳導(dǎo)速度為13.37±1.89，C組為21.43±2.18，A組與C組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，A組與B組比較差異有顯著性(P＜0.05)，說明神經(jīng)恢復(fù)效果優(yōu)于B組。組織學(xué)觀察見3組移植體遠端吻合口橫切面再生神經(jīng)纖維呈微束狀，透射電鏡觀察再生神經(jīng)纖維具有正常的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。結(jié)論:經(jīng)化學(xué)萃取的去細胞兔脛神經(jīng)基膜管能夠移植于大鼠，成功修