p53與ER-alpha在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變的表達(dá)及功能研究.pdf

1、前言：乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變是指起源于乳腺終末導(dǎo)管小葉單位并局限在乳腺導(dǎo)管小葉系統(tǒng)的一組在細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)上呈不同程度增生的病變。包括普通型導(dǎo)管增生(usual ductal hyperplasia,UDH)、非典型導(dǎo)管增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)和導(dǎo)管原位癌(ductal carcinoma,in situ,DCIS)。這些病變與發(fā)生浸潤(rùn)性乳腺癌的危險(xiǎn)性相關(guān),且這種危險(xiǎn)度隨著導(dǎo)管內(nèi)增生性病變的

2、發(fā)展呈逐漸升高的趨勢(shì)。P53基因是一種重要的抑癌基因,在細(xì)胞周期調(diào)控、損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡及抑制腫瘤的發(fā)生等方面發(fā)揮著重要的作用。其基因突變和蛋白積累與人類(lèi)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系,與疾病的臨床進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。雌激素信號(hào)傳導(dǎo)通路在正常乳腺組織發(fā)育及乳腺癌變的過(guò)程中起著十分重要的作用,雌激素通過(guò)類(lèi)固醇激素核受體超家族中的雌激素受體(estrogen receptor,ER)發(fā)揮其功能,ER-alpha(ERα)在這個(gè)過(guò)程中起至關(guān)重要

3、的作用,乳腺癌患者的ERα水平作為內(nèi)分泌治療和判斷預(yù)后的一個(gè)重要生物指標(biāo)己被人們普遍證實(shí)和接受。目前研究表明p53基因突變及突變型p53蛋白表達(dá)對(duì)乳腺癌的臨床分期和預(yù)后產(chǎn)生負(fù)性影響,ERα在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要的作用,但其在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中的研究非常的少。
　　 目的：探討p53與ER-alpha(ERα)在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變的表達(dá)及功能。通過(guò)HRM、基因測(cè)序及組化研究在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中p53的外顯子突變及p53

4、蛋白表達(dá)情況。研究伴癌的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變與不伴癌的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變ERα與p53蛋白表達(dá)的差異,用甲基化PCR研究乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中ERα基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化,并分析ERα基因啟動(dòng)子區(qū)與ERα蛋白表達(dá)的相關(guān)性。初步闡明乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中p53與ER-alpha的表達(dá)及功能。
　　 材料與方法：采用高分辨率熔解曲線(xiàn)、測(cè)序及免疫組化研究240例乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中p53外顯子5-8的突變及蛋白表達(dá)情況。用組化研究12

5、9例不伴癌的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變及86例伴癌的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中p53及ERα蛋白表達(dá)差異。用甲基化特異性PCR檢測(cè)98例乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變ERα四個(gè)CpG島密集區(qū)甲基化及ERα蛋白表達(dá),并分析二者相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1、乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中p53的外顯子突變及p53蛋白表達(dá)情況
　　 1)40例UDH中未出現(xiàn)突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá),在14.6％(19/130)的ADH出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá),在31.4

6、％(22/70)的DCIS中出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá),三者間差異顯著(p＜0.05)。
　　 2)經(jīng)過(guò)HRM分析,共17例患者DNA熔解曲線(xiàn)與野生型標(biāo)準(zhǔn)品熔解曲線(xiàn)大于閾值結(jié)合測(cè)序分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),其中16例出現(xiàn)p53外顯子突變。P53在UDH、ADH及DCIS中的突變率為0.0％(0/35),12.7％(8/63)和21.6％(8/37),三者間差異顯著(p＜0.05)。
　　 3)在突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中p5

7、3外顯子突變發(fā)生率為71.4％(16/21),在突變型p53蛋白表達(dá)陰性組織其外顯子突變發(fā)生率為0.8％(1/119)。Spearman相關(guān)性分析示突變型p53蛋白表達(dá)與p53外顯子突變呈正相關(guān)(r=0.792,p＜0.01)。
　　 2、伴癌的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變與不伴癌的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變ERα與p53蛋白表達(dá)的差異
　　 1)79例UDH中均未出現(xiàn)突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá),伴癌的UDH也未發(fā)現(xiàn)突變型p53蛋白的表

8、達(dá)。P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)于41.5％(17/41)原位癌和42.2％(19/45)IDC,均明顯高于ADH(14.6％,19/136)。P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)于18.2％(14/77)單純性ADH,31.0％(9/29)伴原位癌的ADH(ADH/DCIS),26.7％(8/30)伴侵潤(rùn)性導(dǎo)管癌的ADH(ADH/IDC),三者間表達(dá)率無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　 2)UDH中ERα均陽(yáng)性表達(dá)(79/79,100％),ADH中ERα

9、陽(yáng)性表達(dá)率為86.8％(118/136),明顯低于UDH(p＜0.001),但高于DCIS(28/41,68.3％,p＜0.001)及IDC(26/45,57.8％,p＜0.001)。ERα在79.31％(23/29)伴原位癌的ADH(ADH/DCIS)中陽(yáng)性表達(dá),在76.67％(23/30)的伴侵潤(rùn)性導(dǎo)管癌的ADH(ADH/IDC)中陽(yáng)性表達(dá),均明顯低于其在單純性ADH中的表達(dá)(72/77,93.51％),p＜0.05。
　　

10、 3)在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中,Pearson's相關(guān)分析示突變型p53蛋白的核聚集與Era陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為-0.512,p＜0.01。我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)同一ADH連續(xù)切片組化染色中可以發(fā)現(xiàn)p53蛋白的核聚集與ERα陽(yáng)性表達(dá)有相反的趨勢(shì)。
　　 3、乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中ERa蛋白表達(dá)及其基因啟動(dòng)子甲基化情況
　　 1)在21例UDH中ERα均陽(yáng)性表達(dá)(21/21,100％),ADH中ERα陽(yáng)性表達(dá)率為89.8％(44

11、/49),明顯低于UDH(p＜0.05),但高于DCIS(20/28,71.4％,p＜0.05)。
　　 2)98例乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變甲基化率為19.4％(19/98),其中21例UDH的ERα甲基化發(fā)生率為4.7％(1/21),49例ADH的ERα甲基化發(fā)生率為16.3％(8/49),28例DCIS的ERα甲基化發(fā)生率為32.1％(9/28),其中DCIS中ERα甲基化發(fā)生率顯著高于UDH(32.1％vs.4.7％,x2=5

12、.53,p=0.01)
　　 3)在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中ERα基因啟動(dòng)子甲基化與ERα陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為-0.53,p＜0.01。
　　 結(jié)論：
　　 1、p53基因突變及突變型p53蛋白核表達(dá)發(fā)生于乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中的ADH與DCIS,且p53基因突變是突變型p53蛋白核聚集的重要原因,其可能為乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的早期事件。
　　 2、在伴癌和不伴癌的UDH中均未出現(xiàn)突變型p53蛋白核聚集,且其均

13、陽(yáng)性表達(dá)ERα,在14.6％的ADH中出現(xiàn)突變型p53蛋白核聚集,且伴癌的ADH與不伴癌的ADH中其表達(dá)無(wú)明顯差異。ERα在伴癌的ADH中表達(dá)明顯低于不伴癌的ADH。不伴癌的ADH與伴癌的ADH雖然它們有相同的形態(tài)學(xué)表現(xiàn),但形成的分子機(jī)制可能存在差異。
　　 3、在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中ERα在UDH中均陽(yáng)性表達(dá),ADH中ERα陽(yáng)性率低于UDH,高于DCIS,在乳腺UDH到ADH,再到DCIS中,ERα蛋白表達(dá)率是漸下降的。DC