2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:血管疾病是世界上發(fā)病率最高的疾病之一,而血管移植術(shù)是其目前主要的治療手段。臨床上應(yīng)用的血管移植術(shù)材料主要來源為自體血管、異體血管和人工材料。目前,大、中口徑人工血管移植應(yīng)用效果較好,而小口徑移植血管(直徑<6mm)易發(fā)生吻合口內(nèi)膜增生以及血栓形成,遠(yuǎn)期通暢率不理想。血管組織工程技術(shù)為血管移植術(shù)所需材料、特別是小口徑血管,提供了新途徑。但目前,構(gòu)建小口徑組織工程化血管仍不盡如人意,如在人工血管內(nèi)壁種植血管內(nèi)皮細(xì)胞周期較長,短期內(nèi)不能

2、形成完整內(nèi)膜,無法滿足臨床需求,而且同樣存在遠(yuǎn)期通暢率不理想等問題。為此本課題將新鮮牛心包用于體外實驗研究,將豬來源小口徑血管用于體內(nèi)實驗研究,應(yīng)用組織工程中的脫細(xì)胞技術(shù)和化學(xué)交聯(lián)技術(shù)進(jìn)行預(yù)處理,再進(jìn)行肝素結(jié)合以及負(fù)載生長因子等改性處理,以期短期高效地制備出具有抗凝血活性、可誘導(dǎo)自體內(nèi)皮再生的小口徑人工血管。
   方法:
   (一)材料前期處理:反復(fù)凍融+TritonX-100聯(lián)合作用對新鮮牛心包膜進(jìn)行脫細(xì)胞處理,行

3、HE染色后光鏡下觀察脫細(xì)胞效果;采用碳化二亞胺(EDC)作為交聯(lián)劑,交聯(lián)脫細(xì)胞牛心包膜,并通過生物力學(xué)檢測、體外膠原酶降解實驗以及變性溫度測試考察交聯(lián)程度。
   (二)材料表面肝素化處理,采用三種途徑負(fù)載肝素:(1)EDC共價鍵合肝素;(2)聚乙烯亞胺(PEI,MW=1800D,10kD,20kD)離子結(jié)合肝素;(3)EDC-PEI共價-離子聯(lián)合負(fù)載肝素,即在EDC共價鍵合肝素基礎(chǔ)上再采用PEI離子結(jié)合肝素。采用電感耦合等離子

4、體質(zhì)譜儀(ICP-MS)和紅外光譜評價材料負(fù)載肝素情況,采用接觸角測量儀評價材料表面的親疏水性,檢測肝素化材料的含水量,并通過溶血試驗、血小板粘附實驗、抗凝血時間、復(fù)鈣時間及細(xì)胞毒性試驗評價材料的血液相容性及細(xì)胞相容性。
   (三)肝素化材料負(fù)載血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF165)實驗,分別考察EDC共價鍵合肝素、PEI離子結(jié)合肝素以及共價-離子聯(lián)合肝素化材料對碘標(biāo)記VEGF165(125I-VEGF165)的控制釋放能力,

5、并進(jìn)行促血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖實驗。
   (四)將篩選出的最佳肝素化方式運用到小口徑異種血管的表面改性,通過對犬實施血管置換手術(shù)觀察這種小口徑異種血管的可行性。
   結(jié)果:
   (一)光鏡下觀察發(fā)現(xiàn),材料中的細(xì)胞脫除徹底,細(xì)胞外基質(zhì)形態(tài)良好,結(jié)構(gòu)完整,排列有序,表明反復(fù)凍融+TritonX-100聯(lián)合作用是一種有效、經(jīng)濟、快捷的脫細(xì)胞方法。脫細(xì)胞基質(zhì)經(jīng)EDC交聯(lián)處理后,力學(xué)性能及變性溫度較新鮮牛心包顯著提高且具有

6、良好的抗降解性能。
   (二)PEI離子結(jié)合肝素量與結(jié)合層數(shù)呈正相關(guān),可通過調(diào)節(jié)結(jié)合層數(shù)達(dá)到所需肝素量要求,而EDC共價鍵合肝素量為定值,與PEI離子結(jié)合肝素層數(shù)達(dá)到18層左右時的肝素量相當(dāng)。此外,采用三種分子量的PEI分別進(jìn)行離子結(jié)合15層肝素處理,含水量及接觸角測試結(jié)果表明PEI1800D處理組含水能力和親水性能均優(yōu)于PEI10kD、PEI20kD處理組;溶血試驗中,PEI1800D溶血率為2.66%,PEI10kD溶血率

7、為5.02%,PEI20kD溶血率為5.58%,表明PEI1800D溶血試驗合格。通過上述實驗篩選出PEI1800D作為陽離子劑進(jìn)行后續(xù)實驗。分別對交聯(lián)對照組、EDC共價鍵合肝素組、PEI1800D離子結(jié)合肝素組、EDC.PEI1800D聯(lián)合負(fù)載肝素組進(jìn)行溶血試驗、血小板粘附、凝血時間、復(fù)鈣時間測試,發(fā)現(xiàn)EDC共價鍵合肝素組溶血試驗不合格;EDC-PEI1800D聯(lián)合負(fù)載肝素組抗凝血效果最佳,經(jīng)過長時間生理鹽水浸泡(15d),該組抗凝血

8、性能保持最好。細(xì)胞毒性試驗中,PEI1800D離子結(jié)合肝素組為0.5級,EDC-PEI1800D聯(lián)合負(fù)載肝素組為1.0級,細(xì)胞毒性試驗合格,優(yōu)于EDC共價鍵合肝素組的1.3級。
   (三)肝素化材料對VEGF165控釋實驗結(jié)果顯示,EDC共價鍵合肝素對VEGF165的控釋力優(yōu)于PEI1800D離子結(jié)合肝素組,驗證了共價鍵合穩(wěn)定性高于離子結(jié)合方式,因此,采用EDC-PEI聯(lián)合負(fù)載肝素方式可以彌補單純使用離子結(jié)合肝素穩(wěn)定性差的缺點

9、。內(nèi)皮細(xì)胞增殖實驗中,EDC-PEI1800D聯(lián)合負(fù)載肝素結(jié)合VEGF165組促細(xì)胞增殖力最好。
   (四)結(jié)合VEGF165的EDC-PEI1800D聯(lián)合肝素化小口徑血管移植后,短期觀察通暢效果良好,需要進(jìn)一步長期觀察。
   結(jié)論: EDC-PEI1800D聯(lián)合負(fù)載肝素結(jié)合VEGF165方式具有良好的抗凝血性、促血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力,同時具有一定的降解性能和適當(dāng)?shù)牧W(xué)性能,制備周期短,凍干滅菌后可室溫長期保存,為小

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