組織工程構(gòu)建小口徑人工血管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為三部分: 第一部分組織工程血管種子細(xì)胞的培養(yǎng) 目的：為構(gòu)建組織工程血管提供種子細(xì)胞。 方法：無菌條件下采集大鼠及兔的骨髓，肝素抗凝，經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液(相對(duì)密度為1.073g·mL-1)密度梯度離心分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，進(jìn)而貼壁培養(yǎng)，獲得骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)并傳代。倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察及流式細(xì)胞術(shù)鑒定。 結(jié)論：所培養(yǎng)的MSCs為研究組織工程血管提供了細(xì)胞來源。 第二部分組織工程血管

2、支架材料的制備及材料生物相容性比較 目的：為構(gòu)建組織工程血管提供支架材料并比較材料生物相容性。 方法：和清華大學(xué)化工系合作，用高分子可降解材料聚3-羥基戊酸共聚物(PHBV)與聚丁二酸丁二酯(PBS)作為支架材料，運(yùn)用流延成膜的方法制成不同質(zhì)量百分比共混材料膜片；將培養(yǎng)的第3代兔MSCs種植于膜片上，于培養(yǎng)的第1、3、7、10、14天，倒置顯微鏡下、蘇木素-伊紅染色、甲苯胺藍(lán)染色、掃描電鏡檢查觀察材料與兔MSCs種植情況

3、；四唑鹽比色法檢測(cè)材料上細(xì)胞增殖率；乳酸脫氫酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)材料的細(xì)胞毒性。 結(jié)論：PHBV/PBS=50/50共混材料組更適合兔MSCs黏附與增殖；甲苯胺藍(lán)染色方法與其他形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)方法相比，具有結(jié)果顯示快，操作簡(jiǎn)便，花費(fèi)低廉等特點(diǎn)。 第三部分動(dòng)態(tài)種植和培養(yǎng)在血管組織工程中的應(yīng)用 目的：尋找一種好的體外構(gòu)建組織工程血管的方法。 方法：以兔MSCs為種子細(xì)胞，在PHBV/PBS=50/50共混材料構(gòu)成的血管支架上先