體外構(gòu)建小口徑組織工程化血管的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定[目的：分別建立新西蘭白兔、Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增的方法，為構(gòu)建組織工程化血管提供種子細(xì)胞。方法：采用percoll分離液(1.073g·ml-1)經(jīng)密度梯度離心和貼壁法，從骨髓中分離出兔及大鼠BMSCs，經(jīng)過(guò)傳代、擴(kuò)增，進(jìn)行生物學(xué)觀察及流式細(xì)胞儀鑒定。結(jié)果：成功建立BMSCs體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增的方法。倒置顯微鏡下BMSCs呈柵欄狀排列。流式細(xì)胞儀結(jié)

2、果顯示，原代大鼠BMSCs表面標(biāo)志CD90、CD44呈陽(yáng)性，CD31、CD45呈陰性。結(jié)論：所培養(yǎng)的BMSCs為進(jìn)一步構(gòu)建組織工程化血管提供了充足的細(xì)胞來(lái)源。 第二部分組織工程化血管材料的初選及毒性評(píng)價(jià)目的：為構(gòu)建組織工程化血管選擇、合成支架材料，對(duì)材料進(jìn)行體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)。方法：與清華大學(xué)化工系合作，以聚己內(nèi)酯、聚乙二醇、4，4-二苯基甲烷二異氰酸酯為原料、分別以二月桂酸二丁基錫、辛酸亞錫為催化劑，通過(guò)純粹本體法與溶

3、液法相結(jié)合的二步法合成熱塑性芳香族聚酯型聚氨酯(PU)。該P(yáng)U的硬段為4，4-二苯基甲烷二異氰酸酯(MDI)，軟段為聚己內(nèi)酯(PCL)和聚乙二醇(PEG)的共聚物，以擴(kuò)鏈劑丁二醇(BDO)進(jìn)行擴(kuò)鏈。采用ISO10993-1.1997及GB/T16886.1-1997中規(guī)定的四唑鹽(MTT)比色法、瓊脂覆蓋法對(duì)本實(shí)驗(yàn)組采用的幾種支架材料進(jìn)行了體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：以辛酸亞錫為催化劑合成的PU在MTT比色法中毒級(jí)為1級(jí)，瓊脂覆蓋法中材

4、料周圍及脫色區(qū)內(nèi)細(xì)胞溶解評(píng)價(jià)(Z/L值)為1/1。結(jié)論：以辛酸亞錫為催化劑合成的PU可用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。MTT法、瓊脂覆蓋法在評(píng)判生物材料毒性方面，是快速、簡(jiǎn)便、有效的方法。 第三部分聚氨酯不同低溫等離子體改性及組織相容性評(píng)價(jià)目的：為構(gòu)建組織工程化血管提供組織相容性好的支架材料。方法：以CO2、O2、NH3、SO2四種低溫等離子體，每種等離子分別輻照2min、5min、10min、15min對(duì)PU膜進(jìn)行了改性，用生物學(xué)

5、、材料學(xué)兩類方法對(duì)改性前后PU表面的理化特性及組織相容性進(jìn)行比較。結(jié)果：改性后材料的表面粗糙度有所增加，并成功引入了-OH、-COOH、-NH2、-SO3H等極性基團(tuán)，這些基團(tuán)明顯改善了PU表面的組織相容性。與改性前及其它方法相比，O2等離子體輻照10min的PU組織相容性改善最為顯著。結(jié)論：低溫等離子體是一種有效的改善PU組織相容性的方法。O2等離子體輻照10min的改性效果最好。 第四部分動(dòng)態(tài)反應(yīng)器構(gòu)建組織工程化血