一種新型小口徑人工血管的制備——去內(nèi)皮異種血管再內(nèi)皮化的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目前,各種直徑大小的血管移植物的需求日益增多。臨床應(yīng)用中,一般認為Dacron(滌綸)、ePTFE(聚四氟乙烯)等合成型血管在大口徑血管移植中效果可靠,有肯定的遠期通暢率。但是,在小口徑血管(內(nèi)徑<6mm)移植中,由于血管中高張力、低血流的特殊狀態(tài),導(dǎo)致了很高的移植失敗率。小口徑血管移植物的研究仍然面臨很大困難:合成型血管由于吻合處易發(fā)生內(nèi)膜增生和血栓形成,遠期通暢率并不滿意;自體血管由于來源有限,異體血管和異種血管由于易產(chǎn)生免疫排斥反

2、應(yīng),臨床應(yīng)用也受到限制;組織工程化血管的制備工藝還不成熟。因此,構(gòu)建一種良好的小口徑血管移植物正成為人工血管研究的熱點。本研究采用原代培養(yǎng)的兔動脈內(nèi)皮細胞作為種子細胞,以超低溫處理去除內(nèi)皮細胞的大鼠頸動脈血管為血管基質(zhì),旋轉(zhuǎn)加靜態(tài)培養(yǎng)使其完成內(nèi)皮化,然后進行植入兔股動脈的動物實驗,為小口徑血管移植材料的研究嘗試新的思路,并探討異種血管移植的免疫排斥及早期通暢率等問題。 本研究的主要內(nèi)容和結(jié)論是: 1.采用改進的Ⅱ型膠原酶

3、消化法獲取兔動脈內(nèi)皮細胞,進行原代及傳代培養(yǎng),并對細胞進行鑒定。光鏡下觀察,酶消化法分離、培養(yǎng)的原代兔動脈內(nèi)皮細胞呈典型的“鋪路石”狀鑲嵌排列,細胞為扁平多角形。透射電鏡下可見培養(yǎng)細胞漿內(nèi)Weibel-Palade小體。結(jié)果表明,培養(yǎng)的原代內(nèi)皮細胞具有內(nèi)皮細胞的正常特征,可以用于實驗研究。 2.采用超低溫處理去除Wistar大鼠頸總動脈(內(nèi)徑約1mm)的內(nèi)皮細胞。H&E染色和掃描電鏡觀察的結(jié)果顯示,采用超低溫處理的Wistar大

4、鼠頸動脈血管內(nèi)皮細胞完全去除,處理后的血管其他組織保留完整。 3.原代培養(yǎng)至2-3代的兔動脈內(nèi)皮細胞(RAECs)高密度(2×106cell/cm2)接種于去除內(nèi)皮細胞的大鼠血管內(nèi)腔面,旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)2h后,再在37℃,5%CO2條件下靜態(tài)培養(yǎng)3-5天。AgNO3染色和掃描電鏡下觀察:將RAECs種植于超低溫處理后的大鼠頸總動脈內(nèi)腔面3-5天后,細胞完全覆蓋血管內(nèi)壁,融合成單層。 4.以正常異體兔股動脈(RAGs)組和去內(nèi)皮W

5、istar大鼠頸動脈(DRAGs)組作為對照組,將重新內(nèi)皮化Wistar大鼠頸動脈(RRAGs)植入兔股動脈,進行動物實驗(每組六只),檢測組織病理學變化、內(nèi)皮細胞覆蓋情況及其早期的通暢率。通過掃描電鏡和H&E染色切片觀察:移植后1周,RRAGs組移植段內(nèi)腔有大量內(nèi)皮細胞,外膜少量淋巴細胞浸潤,與RAGs組結(jié)果類似;而DRAGs組內(nèi)腔彈力膜裸露,少量內(nèi)皮細胞覆蓋,外膜大量淋巴細胞浸潤。移植后4周,RRAGs組移植段通暢,內(nèi)腔基本被內(nèi)皮細

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