雌激素和HSP27與冠心病的關系及其對內皮細胞功能的影響.pdf

1、研究背景:近年來,冠心病(coronary heart disease,CHD)發(fā)病率逐年升高,已成為影響人類健康的主要疾病之一。研究其病理生理機制并控制相應的危險因素是當今醫(yī)學研究的重要課題。目前認為,冠心病的發(fā)病是在多種危險因素作用下,是冠狀動脈發(fā)生嚴重粥樣硬化性狹窄和阻塞,或在此基礎上合并痙攣以及血栓形成,血管阻塞,引起冠狀動脈供血不足,心肌缺血或梗塞的一種心臟病。內皮功能損傷、平滑肌細胞增殖、血小板激活聚集以及血栓形成是其主要機

2、制,其中炎性反應貫穿整個過程。冠心病男女患病率差異極大,絕經期前女性發(fā)病率與男性相比為1:3～1:10,絕經后女性與男性趨于一致。這種差異不能完全由常見的冠心病危險因素來解釋,提示與雌激素的水平有關。
　　雌激素在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。雌激素能影響血脂代謝,可降低血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平,并升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C);雌激素具有抗氧化作用,本身可以清除自由基,并可抗脂質過

3、氧化反應;雌激素可以改善內皮功能,減少縮血管物質的釋放,使血管擴張從而增加血流量,還能刺激成熟內皮細胞釋放一氧化氮并產生抗內皮細胞凋亡和促增殖作用,同時它還可以加速血管損傷后的管壁的再內皮化過程,這些方面都可以起抗動脈粥樣硬化的作用。但雌激素的具體作用機制尚有待進一步深入研究。
　　血管內皮是介于循環(huán)血液與血管平滑肌之間的生理屏障。內皮功能障礙(Endothelial dysfunction,ED)是動脈粥樣硬化(atherosc

4、lerosis,AS)之源,存在于AS發(fā)生、發(fā)展的各個階段,預防及控制內皮功能障礙已成為防治冠心病的新趨勢。
　　熱休克蛋白27(Heat shock protein27,HSP27)是小分子量熱休克蛋白家族(Small Heat shock protein,sHSP)中的重要一員,在機體應激狀態(tài)下表達增加,通過分子伴侶作用、調節(jié)細胞運動、抗細胞凋亡、抗氧化應激和抗炎等作用保護細胞功能。最近有報導指出HSP27是一種動脈粥樣硬化的

5、生物學標志,血清HSP27水平與動脈粥樣硬化程度呈負相關。HSP27可能成為心血管疾病治療的新靶點。
　　第一部分冠心病患者血清雌激素水平與HSP27和血脂水平的關系
　　目的:研究表明雌激素可通過調節(jié)脂代謝在心血管疾病中起保護作用。HSP27是一種動脈粥樣硬化的生物學標志物,血清HSP27水平與動脈粥樣硬化程度呈負相關。HSP27可由雌激素誘導產生,是一種ERβ相關蛋白,并可與ERβ共同抑制雌激素信號。那么冠心病患者血清H

6、SP27水平與雌激素水平的相關性如何?血清HSP27水平是否與雌激素調節(jié)的血脂水平相關?HSP27是否參與雌激素對脂質的調節(jié)?本實驗擬通過收集冠心病患者和健康人血清,檢測血清HSP27、雌激素和血脂含量,來觀察雌激素與HSP27和血脂的相關性。
　　方法:按照研究入選標準,調查2009年2月至2009年9月期間湖南省郴州市第一人民醫(yī)院心臟內科住院的冠心病患者和健康體檢者。1.記錄研究對象的臨床資料:年齡、性別、身高、體重、心率、生

7、活習慣、糖尿病史、高血壓病史。2.使用Bayer ADVIA2400型全自動生化分析儀,采用酶法檢測患者血脂水平。3.使用Bayer ADVIA Centaur型全自動化學發(fā)光免疫分析儀,采用化學發(fā)光法測定血清雌二醇(E2)水平。4.ELISA法檢測血清HSP27水平。
　　結果:CHD組年齡、BMI、高鹽飲食、吸煙、飲酒、糖尿病發(fā)病率、高血壓病發(fā)病率,均明顯高于健康對照組。血清E2、HSP27和血脂水平在CHD組與健康對照組之間

8、、女性CHD組與男性CHD組之間,以及女性CHD患者≤55歲組和>55歲組之間有顯著性差異。冠心病患者血清E2水平與HSP27及血脂水平之間的線性相關分析顯示:血清E2水平與TC、LDL-C之間呈顯著負相關,相關系數 r分別為-0.6669(P<0.05)、-0.5739(P<0.05);E2與 HDL-C、HSP27水平呈顯著正相關,相關系數r分別為0.7019(P<0.01)、0.7946(P<0.01);HSP27水平與血脂之間沒

9、有明顯相關性。
　　第二部分 HSP27對雌激素誘導的內皮保護作用的影響
　　目的:第一部分實驗結果顯示冠心病患者血清HSP27水平與雌激素水平相關,HSP27不參與雌激素調節(jié)脂質代謝。那么HSP27是否參與雌激素的內皮保護作用?外源性雌激素是否也能誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVEC) HSP27表達增加,是否具有劑量依賴性?本實驗擬通過不同濃度雌二醇(E2)及雌激素受體拮抗劑他莫昔芬(tamoxifen)處理HUVEC來觀察

10、HSP27表達的改變,以及通過HUVEC轉染HSP27 siRNA來觀察HSP27對雌激素內皮保護作用影響。
　　方法:1.分別用不同濃度(10-9、10-8、10-7mol/L) E2處理 HUVEC24小時;10-7mol/L雌二醇及10-6mol/L他莫昔芬處理HUVEC24小時。以空白組為陰性對照,RT-PCR和Western blot檢測HSP27的表達。2.分別轉染HSP27 siRNA和mock RNA48小時后,再

11、與10-7mol/L E2孵育24小時?？瞻捉M做為陰性對照,RT-PCR和Western blot檢測HSP27的表達;分別用硝酸還原酶法和ELISA法檢測培養(yǎng)基中NO和ET-1的含量;ELISA法檢測細胞表面ICAM-1的含量。
　　結果:不管是mRNA水平還是蛋白水平,E2處理HUVEC可上調HSP27的表達,并且具有劑量依賴性,表達的峰值在10-7mol/L。10-6mol/L他莫昔芬可阻斷10-7mol/L E2的作用。R

12、T-PCR、Western blot檢測HSP27 siRNA序列能明顯下調HSP27mRNA及蛋白的表達。HUVEC轉染 HSP27 siRNA48小時后再與10-7mol/L E2孵育24小時,能顯著減弱E2對內皮細胞分泌NO和ICAM-1的影響,而對ET-1沒有明顯影響。
　　結論:
　　1.冠心病患者血清E2水平與HSP27正相關,雌激素的抗心血管病作用可能與HSP27有關。
　　2.E2可誘導HUVEC產生H