人促血液血管細胞生成素對內皮細胞增殖功能的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：人促血液血管細胞生成素(HAPO)，是我們實驗室從再生障礙性貧血病人尿中純化出的一種蛋白質，基因序列比較發(fā)現它是一種新的細胞因子。HAPO基因的同源性分析(BLAST)結果表明，該因子是蛋白多糖4基因的一種新的剪接體。功能研究發(fā)現，HAPO在體外能明顯刺激人的造血及骨髓細胞和人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)的增殖，而且HAPO主要作用于人的造血和血管內皮干/祖細胞的早期階段，是一種早期生長因子；HAPO還可以拮抗人巨核細胞白血病細胞

2、系MO7e去除因子誘發(fā)的凋亡；體內研究發(fā)現HAPO有放射保護作用，能明顯提高經同位素亞致死量照射小鼠存活率，加速其造血功能的恢復。為了能更加深入的了解HAPO的生物學功能，我們以HUVEC為實驗模型，研究了HAPO促進細胞增殖所涉及的信號轉導機制。 方法：在本實驗里，我們用MTT和BrdU摻入的方法檢測了HAPO對于HUVEC增殖能力的影響，并用流氏檢測了HUVEC細胞周期的分布。我們用Western blot的方法檢測了HAP

3、O對于HUVEC內不同信號轉導通路的激活情況。信號轉導常用阻斷方法來進行分析。激酶抑制劑是一種小分子化合物，近年來出現的一些高特異性蛋白激酶抑制物能夠專一高效地抑制特定蛋白激酶的功能。目前，在國內外研究信號轉導機制的文獻中，幾乎絕大部分都采用了激酶抑制劑作為阻斷分析研究的首選。該方法特異，簡單，易于量化，重復性好，且對細胞影響較少。此外，我們對HAPO與其他作用比較明顯的內皮細胞刺激因子的協(xié)同作用進行了檢測。 結果：HAPO能增

4、加內皮細胞的增殖能力，并呈劑量依賴性。500 ng/ml HAPO的效果最為明顯，可以達到130±5％(MTT)和142±6％(BrdU)。通過Westernblot分析，我們發(fā)現HAPO在HUVEC中激活了PI3-K/Akt信號通路，50μM的LY294002可以完全抑制HAPO造成的Akt的磷酸化。我們用抑制劑阻斷的方法證明了HAPO是通過激活PI3-K/Akt信號通路來促進HUVEC增殖的。進一步的檢測與分析發(fā)現HAPO可以明顯的