人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRP的生成及其對內(nèi)皮功能的影響.pdf

1、目的：升高的CRP水平被看作一個強有力的心血管疾病預(yù)測因子。肝臟是產(chǎn)生CRP的主要器官，在急性時相反應(yīng)時期，血漿CRP濃度常上升到100-200μg/ml，但預(yù)測心血管疾病的CRP濃度一般為1.3μg/ml，故其它來源產(chǎn)生的CRP也許可以更好的解釋為何低濃度的CRP可以預(yù)測心血管疾病。有研究發(fā)現(xiàn)粥樣硬化的動脈也可以產(chǎn)生CRP，但具體是哪種細胞產(chǎn)生的仍不明確。大量證據(jù)表明CRP，尿酸，高糖和高胰島素均和內(nèi)皮細胞功能紊亂有密切的關(guān)系，本實驗

2、以人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)為研究對象， 探討：1、內(nèi)皮細胞是否分泌CRP。2、CRP對內(nèi)皮細胞分泌功能的影響。3、其它干預(yù)因素如尿酸(UA)，血管緊張素II(AngII)，葡萄糖，胰島素等對內(nèi)皮細胞分泌功能的影響。 方法：1、將臍靜脈內(nèi)皮細胞與不同濃度的UA、血管緊張素I(AngI)、葡萄糖、胰島素等物質(zhì)共同孵育48小時，用PCR檢驗內(nèi)皮細胞CRPmRNA的變化。將上清液離心濃縮用ELISA法測CRP濃度，觀察內(nèi)皮

3、細胞是否分泌CRP。同時觀察上述干預(yù)因素對內(nèi)皮細胞分泌CRP及其它因子的影響。 2、將不同濃度的CRP內(nèi)皮與細胞孵育24小時后分別測定AngII，內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)，一氧化氮(NO)，超氧陰離子(O2-)，超氧化物岐化酶(SOD)，觀察CRP對內(nèi)皮細胞分泌功能的影響。 3、將培養(yǎng)性質(zhì)穩(wěn)定的內(nèi)皮分組，或單獨加入AngI，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)，Antichymotrypin(胃促胰酶抑制劑)，Ap

4、rotinin(胰蛋白酶抑制劑)和血管緊張素II受體拮抗劑(ARB)，或聯(lián)合應(yīng)用上述物質(zhì)，觀察內(nèi)皮細胞ACE和胃促胰酶途徑AngII產(chǎn)生的活性。同時用ACEI或用ARB阻斷AngII的作用觀察內(nèi)皮細胞eNOS活性和對其產(chǎn)生NO，SOD，O2-的影響。 結(jié)果：1.與UA，AngI，葡萄糖和胰島素共同孵育后，用ELISA和rtPCR方法檢測未發(fā)現(xiàn)HUVECs產(chǎn)生CRP。 2.人重組CRP可以導(dǎo)致內(nèi)皮細胞NOS活性的減低，NO

5、的生成減少，O2-的增加。 3.與AngI(10-2μM)共同孵育后，HUVEC產(chǎn)生的AnII明顯增加(p<0.05)。同AngI組比較，開博通(1000μM)可以抑制21.18％的AngII生成，antichymotrypin抑制50.93％，而Aprotonin抑制20.04％。開博通僅抑制一小部分AngII的生成。將開博通和其它兩種抑制劑聯(lián)合幾乎能抑制全部AngII的生成。局部AngII生成增加使內(nèi)皮細胞NOS活性下降，N

6、O的生成減少，O2-的產(chǎn)生增加，而這些作用可以被厄貝沙坦所逆轉(zhuǎn)。 4.UA(6、12mg/dl)可以使內(nèi)皮細胞NO生成減少，NOS活性減低，O2-增高，對SOD活性影響無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。 5.與對照組比較，葡萄糖(5mM和25mM)和胰島素(100，1000mU/L)均可使AngII升高，呈劑量依賴關(guān)系。25mM葡萄糖+1000mU/L胰島素也可使AngII升高：25mM葡萄糖使NOS活性增強，NO產(chǎn)生增加，

7、SOD活性下降，O2-產(chǎn)生增加(p<0.05)；高濃度胰島素(100，1000mU/L)使內(nèi)皮細胞NOS活性增強，NO產(chǎn)生增加(p<0.05)，且呈劑量依賴性，而對SOD活性及O2-產(chǎn)生的影響無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；25mM葡萄糖+1000mU/L胰島素可使內(nèi)皮細胞NOS活性下降，NO產(chǎn)生減少，SOD活性下降，而O2-產(chǎn)生明顯增加(p<0.05)； 結(jié)論：1、在正常及UA，AngII等刺激因素存在狀態(tài)下培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞中未發(fā)

8、現(xiàn)CRP生成及CRPmRNA的表達。 2、人重組CRP可以導(dǎo)致內(nèi)皮細胞NOS活性的減低，NO的生成減少，O2-的增加。 3、本研究進一步證實AngII在人臍靜脈內(nèi)皮細胞有兩種主要生成途徑，胃促胰酶途徑為主要途徑。 4、局部AngII生成增加可使內(nèi)皮細胞NOS活性下降，NO的生成減少，O2-的產(chǎn)生增加。阻斷AngII的生成或與受體結(jié)合可以使內(nèi)皮細胞NOS活性的增加，NO的生成增加，O2-的產(chǎn)生減少。 5、生