冠心病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞端粒酶活性及肝細(xì)胞生長因子對內(nèi)皮祖細(xì)胞功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 1.觀察體外培養(yǎng)冠心病患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)增殖、遷移和粘附能力與EPCs端粒酶活性之間的關(guān)系。 2.觀察肝細(xì)胞生長因子(HGF)對體外培養(yǎng)冠心病患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移、粘附能力的影響，探討外周血中HGF濃度、CD133+細(xì)胞數(shù)目與EPCs功能之間的關(guān)系。 方法: 1.密度梯度離心法獲取外周血單個核細(xì)胞(MNCs)，接種至明膠包被的培養(yǎng)板上，培養(yǎng)7 d后進(jìn)行細(xì)胞免疫組化鑒定E

2、PCs，采用MTT比色法、Transwell小室和粘附能力測定實(shí)驗(yàn)，觀察EPCs的增殖、遷移和粘附能力。 2.TRAP-PCR銀染法檢測EPCs端粒酶活性。 3.以15例條件齊同的非冠心病患者作對照，觀察15例冠心病患者EPCs數(shù)量及功能的變化。密度梯度離心法獲取外周血MNCs，接種至明膠包被的培養(yǎng)板上，培養(yǎng)4 d后洗去非貼壁細(xì)胞，貼壁細(xì)胞分為HGF干預(yù)組和非HGF干預(yù)組繼續(xù)培養(yǎng)3天，觀察1ng/μl HGF對EPCs的

3、增殖、遷移、粘附能力和凋亡的影響。 4.密度梯度離心法獲取外周血MNCs，以FITC-鼠抗人CD133標(biāo)記，流式細(xì)胞儀上檢測CD133+細(xì)胞數(shù)目；用ELISA法檢測血漿中HGF濃度。 結(jié)果: 1.從人外周血能成功、培養(yǎng)分離EPCs。冠心病患者分離的EPCs增殖、粘附、遷移能力較非冠心病患者下降(P<0.01，P<0.01，P<0.05)。 2.冠心病患者EPCs端粒酶活性較非冠心病患者低(P<0.05)。

4、 3.體外培養(yǎng)中1ng/μl HGF能顯著促進(jìn)冠心病患者EPCs增殖、粘附、遷移的生物學(xué)功能(P<0.05，P<0.01，P<0.05)，能促進(jìn)非冠心病患者EPCs增殖能力(P<0.05)，但對非冠心病患者EPCs粘附、遷移無明顯影響(P>0.05)。冠心病患者EPCs的凋亡與非冠心病患者之間無明顯區(qū)別(P>0.05)，HGF對EPCs凋亡無明顯的保護(hù)作用(P>0.05)。 4.與非冠心病患者相比，冠心病患者外周血中CD

5、133+細(xì)胞數(shù)目少(P<0.01)，血漿中HGF濃度高(P<0.01)。 結(jié)論: 1.冠心病患者EPCs增殖、粘附、遷移功能顯著減弱。冠心病患者EPCs功能顯著減弱可能與EPCs端粒酶活性降低有關(guān)。 2.HGF可以增強(qiáng)冠心病患者EPCs的各項(xiàng)生物學(xué)功能，可以增強(qiáng)非冠心病患者EPCs的增殖能力，但對粘附、遷移無明顯影響。 3.冠心病患者EPCs的凋亡與非冠心病患者之間無明顯區(qū)別，HGF對EPCs凋亡無明顯的