Hib PRP-TT結(jié)合疫苗的制備及其免疫原性研究.pdf

1、流感嗜血桿菌是引起嬰幼兒呼吸系統(tǒng)原發(fā)性感染和病毒性感染時(shí)引起繼發(fā)
　　本試驗(yàn)首先對(duì)Hib49247菌種特性及傳代穩(wěn)定性進(jìn)行試驗(yàn)觀察；然后對(duì)其發(fā)酵及提糖條件進(jìn)行優(yōu)化，所得到純化的Hib莢膜多糖抗原通過(guò)己二酸二肼（ADH）與破傷風(fēng)類毒素（TT）蛋白共價(jià)結(jié)合，制備b型流感嗜血桿菌結(jié)合物。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明,Hib49247菌種具有其菌種特性,發(fā)酵葡萄糖,不發(fā)酵乳糖；且傳代穩(wěn)定；發(fā)酵Hib時(shí)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)因子的加量為Hemin2mg/

2、100mL,NAD1.5mg/100mL,初始pH值應(yīng)為7.2，種子液應(yīng)在OD550nm下光吸收值0.4～0.6之間，發(fā)酵過(guò)程中溶氧應(yīng)控制在20％，培養(yǎng)6～8小時(shí)為宜，通過(guò)100L發(fā)酵罐的中試對(duì)所得參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證發(fā)酵參數(shù)具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性；Hib多糖純化中，采用冷酚抽提4次，30%乙醇沉核酸，65%乙醇沉糖的條件最佳；對(duì)Hib多糖衍化工藝選擇最有水平為pH11.0±0.2，活化時(shí)間為30min,溴化氰加0.5mg/mL；結(jié)合反應(yīng)多糖

3、與蛋白質(zhì)量比為1∶1所得到的結(jié)合物各項(xiàng)指標(biāo)均合格且較穩(wěn)定；并通過(guò)以12.5μg多糖和含2.5μg多糖的結(jié)合物經(jīng)腹腔免疫Balb/c小鼠，用ELISA法檢測(cè)小鼠血清PRP抗體水平；并對(duì)Hib PRP-TT結(jié)合物對(duì)其過(guò)敏原性及TT毒性進(jìn)行觀察。免疫原性試驗(yàn)結(jié)果表明結(jié)合物免疫小鼠能誘導(dǎo)出高水平的血清PRP抗體，而單獨(dú)用多糖免疫小鼠未能誘導(dǎo)高水平的抗體；過(guò)敏原性實(shí)驗(yàn)表明制備的PRP-TT結(jié)合物不會(huì)引起過(guò)敏性癥狀；TT毒性逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TT均未