分支桿菌卡介苗中表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、分支桿菌卡介苗(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin,BCG)是長(zhǎng)期以來一直為人們所接受的結(jié)核疫苗.為了進(jìn)行分支桿菌BCG作預(yù)防和治療性DNA載體的基礎(chǔ)性研究,該實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)合成了編碼口蹄疫病毒(Foot and Mouse Disease Virus)的O,A,C三型多肽疫苗的抗原表位序列作為外源序列,并在序列間設(shè)計(jì)了限制酶切位點(diǎn),合計(jì)76肽,以質(zhì)粒pUC19為載體,所構(gòu)成的質(zhì)粒命名為

2、pFMDV.分支桿菌是一種生長(zhǎng)周期很長(zhǎng)的細(xì)菌,培養(yǎng)一批BCG需兩周以上時(shí)間.為了確保外源基因在分支桿菌中穩(wěn)定增殖,我們采用了分支桿菌整合增殖質(zhì)粒pYUB295.它以熱休克蛋白啟動(dòng)子表達(dá)四環(huán)素抗性,在BCG基因組中整合而增殖.我們把546bp調(diào)控序列插入到合成的FMDV抗原表位序列的下游后,將兩者克隆到質(zhì)粒pYUB295中,再將得到的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BCG中,即可將外源基因整合到BCG基因組中并分泌表達(dá).該文還對(duì)質(zhì)粒pQE-FM進(jìn)行了修飾,并研