抗汞載體的構(gòu)建及在喜溫硫桿菌中的表達(dá).pdf

1、喜溫硫桿菌(Acidithiobacillus caldus)是1994年分離出來(lái)的新菌種，為一種專性自養(yǎng)的極端嗜酸性硫桿菌，它廣泛分布于硫化礦床、酸性礦水及土壤中，在細(xì)菌冶金、煤的脫硫和含硫廢水的處理等方面發(fā)揮著重要作用，同時(shí)在自然界的硫循環(huán)中也占有重要地位。但是在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，因該菌具有生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞得率低及對(duì)重金屬如砷、汞、銀等缺乏抗性等弱點(diǎn)，不僅限制了其應(yīng)用范圍，而且也給實(shí)驗(yàn)室的研究工作帶來(lái)許多不便。要想充分發(fā)揮生物冶金的功能

2、，對(duì)喜溫硫桿菌進(jìn)行遺傳改造勢(shì)在必行。 本實(shí)驗(yàn)將來(lái)自于嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌中的抗汞基因與具有廣泛寄主的：IncQ類群載體質(zhì)粒pJRD215連接，構(gòu)建了組成型及可調(diào)控型的抗汞質(zhì)粒載體pTMJ212、pTMJ213，將其轉(zhuǎn)入E.coli SM10中，并對(duì)E.coli SM10抗汞特性的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明攜帶有質(zhì)粒pTMJ212、pTMJ213的Ecoli SM10對(duì)汞的MIC(最大抑制濃度)分別由5 μg/ml提高至22.5μg

3、/ml、12.5 μg/ml。 通過(guò)接合轉(zhuǎn)移將所構(gòu)建的抗汞質(zhì)粒pTMJ212轉(zhuǎn)入喜溫硫桿菌中，經(jīng)由IncQ類群的RP4質(zhì)粒的帶動(dòng)，以E.coli C600(RP4)為受體菌進(jìn)行反向接合實(shí)驗(yàn)，篩選接合轉(zhuǎn)移子，提取質(zhì)粒電泳檢測(cè)，結(jié)果與來(lái)自于Ecoli SM10中的抗汞質(zhì)粒pTMJ212一致，從而證實(shí)抗汞質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入了喜溫硫桿菌中。通過(guò)對(duì)所構(gòu)建的喜溫硫桿菌基因工程菌的最大生長(zhǎng)量、生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞總蛋白含量的測(cè)定，證明其抗汞特性較野