產(chǎn)前給藥地塞米松對大鼠胎肺形態(tài)結構及Wnt信號轉導途徑影響的實驗研究.pdf

1、目的： 產(chǎn)前應用地塞米松(DEX)可以抑制炎癥反應、促Ⅱ型肺泡細胞成熟、增加肺表面活性物質合成并促其分泌，減少早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合癥(RDS)的發(fā)生，同時也存在阻礙肺發(fā)育的現(xiàn)象。胚胎時期的肺發(fā)育受到多條信號途徑影響，其中Wnt信號轉導途徑參與調(diào)控肺上皮細胞和間質細胞分化、細胞增殖及凋亡等過程，在肺發(fā)育過程中起著重要作用。因此我們采用早產(chǎn)鼠肺模型，比較產(chǎn)前給予不同劑量、不同療程地塞米松對大鼠胎肺形態(tài)發(fā)育及Wnt信號轉導途徑的影響。

2、 方法： 20只孕鼠分5種情況用藥，胎鼠分5組，每組約16只。小劑量、大劑量DEX單程組：分別于孕16、17天注射等量生理鹽水，孕18天腹腔注射DEX 0.4 mg/kg、0.8 mg/kg；小劑量、大劑量DEX多程組：分別于孕16、17、18天腹腔注射DEX 0.4 mg/kg、0.8 mg/kg。注射時DEX均用生理鹽水稀釋至0.5ml；其中小劑量、大劑量DEX單程組和多程組統(tǒng)稱為DEX組。對照組：孕16、17、18天

3、注射等量生理鹽水。雌鼠孕19天時破宮后取胎鼠肺組織作為早產(chǎn)鼠肺模型，每只孕鼠隨機取4只早產(chǎn)鼠，共16只取全肺分別通過光鏡觀察及電鏡技術，分析比較各組胎肺形態(tài)發(fā)育的差異、RT-PCR方法檢測Wnt信號轉導途徑中Wnt7b、Wnt5a、Wnt2、GSK.3p和p-catenin基因mRNA的表達，Westem-Blot、免疫組化方法檢測GSK-3β、β-catenin蛋白表達量和表達部位。 結果： 1.HE染色光鏡觀察結果：

4、DEX組與對照組相比，肺泡數(shù)目減少、肺泡腔結構擴大，肺泡間隔厚度變薄、周圍結締組織減少。其中小劑量DEX單程、多程組及大劑量DEX單程、多程組每視野肺泡計數(shù)，平均肺泡間隔厚度均低于對照組(P<0.01)，平均肺泡表面積均高于對照組(P<0.01)。 2.電鏡觀察結果：DEX組Ⅱ型肺泡上皮細胞內(nèi)可見板層小體且染色深、致密，胞質內(nèi)線粒體等細胞器增多；而對照組內(nèi)難見板層小體、細胞器數(shù)目減少。隨著DEX用藥劑量和次數(shù)的增多，板層小體數(shù)目

5、逐漸增多，基底膜則呈現(xiàn)由完整到斷裂不連續(xù)、由厚薄均一到厚薄不均甚至無法辨認的變化，且大劑量DEX組中的線粒體數(shù)目較小劑量組少，內(nèi)質網(wǎng)也有擴張。 3.RT-PCR結果：DEX組胎肺Wnt7b及β-catenin基因mRNA的表達量均顯著高于對照組（p<0.05)；GsK-3β表達量較對照組減少(P<0.05)。小劑量DEX單程、多程組及大劑量DEX單程組Wnt5a基因mRNA表達均低于對照組(P<0.05)，不同劑量DEX多程組之

6、間差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；DEX組Wnt2基因mRNA表達與對照組相比未見統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 4.Westem_blot結果：大劑量DEX多程組胞漿GSK-3β蛋白表達量較對照組下調(diào)(P<0.05)；DEX組胞漿β-catenin蛋白表達量較對照組明顯下調(diào)(P<0.01)，胞核β-catenin蛋白表達量則較對照組上調(diào)(P<0.05)。隨著DEX劑量的增大、次數(shù)的增多，胞漿β-catenin蛋白表達量不斷減

7、低而胞核β-catenin蛋白表達量不斷增多。 5.免疫組化結果：對照組中β-eatenin在肺間質和實質均有表達，其表達量均低于DEX組(P<0.05)。對照組可見GSK-3p在肺間質和實質也均有表達且最為明顯，其表達量明顯高于DEX組(P<0.05.)，并且小劑量DEX單程組中GSK-3p的表達明顯高于其他DEX組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論： 1.產(chǎn)前給藥DEX可以促進胎肺早期發(fā)育，小劑量、單

8、程DEX即可促進胎鼠肺部成熟，增加用藥劑量或次數(shù)雖然肺部發(fā)育成熟度有所提高但肺泡化受阻的現(xiàn)象也愈加明顯--肺泡直徑變大，肺泡間隔變薄，總肺泡數(shù)減少，肺組織呈大而空的征象。基底膜呈現(xiàn)逐漸由厚薄均一到厚薄不均、由完整到不連續(xù)甚至無法辨認的變化，基底膜的這種變化，影響了細胞的分化、增殖及與間質的交流。 2.產(chǎn)前給藥DEX同時影響了Wnt信號途徑中Wnt7b、Wnt5a、β-catenin及GSK-3β基因的mRNA和蛋白的表達。DEX