羅格列酮對(duì)OLETF大鼠肺組織TGF-β1-JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病(diabctes mellitus，DM)是多種因素引起的以慢性高血糖為特征的全身性代謝紊亂，可導(dǎo)致機(jī)體多器官系統(tǒng)損害的一組臨床綜合征。隨著DM并發(fā)癥研究的深入，DM肺部損害已經(jīng)越來(lái)越受到關(guān)注。近年來(lái)研究證實(shí)DM肺損害也是DM全身多系統(tǒng)病變的一部分，DM可顯著增加肺纖維化的風(fēng)險(xiǎn)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor bcta1，TGF-B1)是促纖維化的細(xì)胞因子，在多種器官纖維化進(jìn)程中扮演

2、重要角色。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminalkinases，JNK)信號(hào)通路為TGF-B1下游的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，JNK的異常表達(dá)可影響TGF-B1的活性，進(jìn)而改變纖維化的進(jìn)程。近年研究發(fā)現(xiàn)，JNK過(guò)度激活與DM肝臟纖維化以及非DM肺間質(zhì)纖維化密切相關(guān)，而關(guān)于TGF-B1/JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與DM肺纖維化的研究尚少。a-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-smooth muscleactin，a-SMA)及Ⅰ型膠原(colla

3、gen I，COL I)是TGF-B1/JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游衡量肺纖維化形成的兩個(gè)重要指標(biāo)。羅格列酮(rosiglitazone，RGT)是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activatcd receptorγ，PPARγ)的合成配體，RGT不僅具有改善胰島素敏感性，降低血糖的作用，還具有潛在的器官保護(hù)作用及抗纖維化的作用。本研究通過(guò)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(emzymelinked immu

4、nosorbent assay，ELISA)觀察自發(fā)性DM大鼠-OLETF大鼠肺組織TGF-B1的表達(dá)變化，應(yīng)用免疫蛋白印跡法(Western Blotting)觀察磷酸化JNK(phosphorylatcd c-Jun NH2-terminal kinascs，p-JNK)、a-SMA及COL I的表達(dá)變化，探討TGF-B1/JNK信號(hào)途徑是否為DM肺纖維化的發(fā)病機(jī)制之一，并設(shè)立RGT干預(yù)組，觀察上述指標(biāo)的變化以探討RGT是否對(duì)DM肺

5、纖維化具有保護(hù)作用。
　　 方法：4周齡OLETF大鼠30只和其同系非DM對(duì)照鼠LETO大鼠8只，在無(wú)特定病原體級(jí)條件下單籠飼養(yǎng)，飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料。大鼠每4周行一次口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(oral glucose tolerance test，OGTT)，。至30周齡時(shí)，共有成模OLETF大鼠16只，隨機(jī)分為模型組(DM組)8只和RGT干預(yù)組8只，LETO大鼠為正常對(duì)照組(N組)。RGT組每日以RGT3mg/kg的給藥劑量灌胃，DM組與

6、N組以等量蒸餾水灌胃，各組均灌胃給藥12周，每日1次。42周齡時(shí)處死大鼠，留取肺組織，部分置于10％中性福爾馬林中固定，部分置于液氮中固定，-80℃低溫冰箱保存后進(jìn)行如下步驟：①HE染色光鏡下觀察肺組織結(jié)構(gòu)變化；②Masson染色觀察肺組織膠原沉積情況；③應(yīng)用ELISA法檢測(cè)各組大鼠肺組織TGF-B1的表達(dá)情況，并用450nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀測(cè)出其對(duì)應(yīng)的蛋白濃度；④應(yīng)用Western Blotting半定量分析大鼠肺組織p-JNK、a-SMA

7、、COLI蛋白的表達(dá)；用凝膠圖象處理系統(tǒng)，以B-actin或GAPDH為內(nèi)參照，以相應(yīng)蛋白條帶與B-actin或GAPDH的比值計(jì)算蛋白的相對(duì)表達(dá)量。
　　 結(jié)果：①HE染色結(jié)果顯示：N組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常；DM組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，支氣管壁增厚，肺泡隔增寬，部分肺泡腔萎縮、塌陷，肺間質(zhì)增加，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；RGT組大鼠肺組織病變較DM組減輕，但肺組織結(jié)構(gòu)未恢復(fù)到正常。②Masson染色結(jié)果顯示：N組大鼠肺泡隔、細(xì)支氣管、小血

8、管周圍僅有少量膠原纖維：DM組肺間質(zhì)膠原纖維增多，排列紊亂；RGT組肺間質(zhì)膠原沉積較DM組減輕，但仍未恢復(fù)至正常。③三組大鼠肺組織均有TGF-B1、p-JNK、a-SMA及COL I表達(dá)。與N組大鼠相比，DM組大鼠肺組織TGF-B1、p-JNK、a-SMA及COLI表達(dá)均顯著增加(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；RGT組與DM組相比，TGF-B1、p-JNK、a-SMA及COL I表達(dá)減少(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　

9、　 結(jié)論：①OLETF大鼠肺組織出現(xiàn)病理結(jié)構(gòu)改變，膠原沉積增多，呈現(xiàn)出纖維化趨勢(shì)，提示肺臟亦是DM的靶器官。②OLETF大鼠肺組織TGF-β1、p-JNK、a-SMA及COL I表達(dá)量較LETO大鼠顯著增加，提示TGF-β1/JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與了DM肺纖維化過(guò)程。③RGT干預(yù)后OLETF大鼠肺組織病理改變明顯減輕，膠原沉積減少，大鼠肺組織TGF-β1、p-JNK、a-SMA及COL I表達(dá)明顯被抑制，提示RGT可減輕DM肺纖維