柔肝化纖顆粒對(duì)肝纖維化ACTA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)致力于研究柔肝化纖顆粒對(duì)肝纖維化大鼠肝組織激活素A(ACTA)表達(dá)、血清卵泡抑素(FS)及肝細(xì)胞凋亡的影響，從而探討柔肝化纖顆?？垢卫w維化的作用及其機(jī)制，完善該藥對(duì)TGF-β超家族其它成員的影響，進(jìn)一步從TGF-β超家族信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)水平上闡明中藥治療肝纖維化的作用機(jī)制及名老中醫(yī)治療肝病的學(xué)術(shù)理論，找出作用靶點(diǎn)的規(guī)律并整理提高，豐富中醫(yī)藥對(duì)肝纖維化的防治方法和方藥。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)選用健康清潔級(jí)大鼠120只，雌雄各半，

2、體重220～250g，隨機(jī)取16只作為正常對(duì)照組（A組）。剩余大鼠進(jìn)行肝纖維化造模，于第4周末造模大鼠隨機(jī)處死8只，證實(shí)肝纖維化形成后，將其余造模大鼠隨機(jī)分為病理模型組（B組）、柔肝化纖顆粒大、中、小劑量組（C組，D組，E組）、大黃蟅蟲丸（F組）及秋水仙堿對(duì)照組（G組）共6組，每組16只。采用四氯化碳(CCl4)復(fù)合法大鼠肝纖維化模型，A、B組4周后灌胃與治療組同容積的生理鹽水;C、D、E、F、G組造模4周后分別給予柔肝化纖顆粒大(20

3、g/kg)、中(10g/kg)、小劑量(5g/kg)、大黃蟅蟲丸(0.2g/kg)、秋水仙堿(100μg/kg)灌胃，以上各組分別于用藥治療后6周、12周處死，剖取肝臟，HE染色后用光鏡觀察大鼠肝組織病理變化和免疫組化法檢測(cè)激活素A(ACTA)表達(dá)、血清卵泡抑素(FS)、肝細(xì)胞凋亡的情況。
　　 結(jié)果:
　　 (1)一般情況:
　　 病理模型組大鼠隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸出現(xiàn)皮毛稀松、色黃、無光澤，進(jìn)食及飲水量減少

4、，體重減輕，部分大鼠大便溏瀉。正常對(duì)照組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，皮毛緊密、色白、有光澤，飲食情況好，活潑好動(dòng)，體重增加。各治療組開始治療后，攝食、體重增加，毛色逐漸光潤(rùn)，活動(dòng)趨于正常。病理模型組動(dòng)物較另外6組動(dòng)物瘦弱，皮毛無光澤，倦怠，精神萎靡，進(jìn)食明顯減少，激惹后煩躁易怒。
　　 (2)肝組織HE及Masson膠原纖維染色光鏡下觀察:
　　 模型組多數(shù)正常小葉結(jié)構(gòu)被破壞或消失，由匯管區(qū)和中央靜脈伸出粗大膠原纖維條索分割、包繞肝

5、小葉，肝細(xì)胞索排列紊亂，肝細(xì)胞水腫明顯，脂肪變性廣泛，部分有壞死。纖維隔內(nèi)有大量單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，各藥物治療組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞明顯減輕，肝臟膠原纖維增生亦明顯減輕，纖維條索疏松變窄。肝細(xì)胞水腫好轉(zhuǎn)，變性情況明顯改善，炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少。其中以柔肝化纖顆粒高、中劑量組肝臟結(jié)構(gòu)改善較為明顯。
　　 (3)免疫組化結(jié)果:
　　 正常組肝組織中幾乎不表達(dá)ACTA，模型組ACTA陽(yáng)性表

6、達(dá)主要位于中央小葉和門靜脈周圍肝細(xì)胞中，并在Kuffer細(xì)胞、類間質(zhì)細(xì)胞質(zhì)及其周圍也可見其表達(dá)，柔肝化纖顆粒治療組陽(yáng)性染色程度均較模型組明顯減輕（P＜0.01）。
　　 (4)RT-PCR
　　 正常肝組織幾乎不表達(dá)ACTAmRNA，而模型組表達(dá)明顯增強(qiáng)，ACTA/GAPDH比值為(0.61±0.21)，遠(yuǎn)高于正常(P＜0.01);柔肝化纖顆粒高、中、低各治療組ACTA/GAPDH比值明顯降低(P＜0.01)
　　

7、 (5)血清FS的表達(dá)變化:
　　 柔肝化纖顆粒大、中劑量組升高血清FS水平的表達(dá)均優(yōu)于秋水仙堿組和大黃蟅蟲丸治療組（P＜0.05）;柔肝化纖顆粒小劑量組與秋水仙堿組、大黃蟅蟲丸組比較差異無明顯意義(P＞0.05)。
　　 (6)柔肝化纖顆粒對(duì)肝纖維化大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響:
　　 正常組大鼠肝組織中偶見凋亡細(xì)胞，模型組大鼠肝小葉內(nèi)有較多凋亡肝細(xì)胞，胞核呈棕黃色。模型組大鼠肝細(xì)胞凋亡較正常組明顯升高（P＜0.01

8、）;柔肝化纖顆粒大、中、小劑量治療組肝細(xì)胞凋亡均較模型組有明顯的降低（P＜0.01），其中柔肝化纖顆粒高劑量組肝細(xì)胞凋亡較低劑量組顯著降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)柔肝化纖顆粒能夠改善肝纖維化大鼠的精神狀態(tài)，皮毛色澤，飲食情況，體重等一般情況。
　　 (2)柔肝化纖顆粒能夠明顯減輕大鼠肝纖維化的程度，有比較強(qiáng)的抗肝纖維化作用。
　　 (3)柔肝化纖顆?？梢越档虯CTA的表達(dá)和升高血清F