毒素清對肺炎痰熱證大鼠肺組織JAK STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的：探討毒素清對肺炎痰熱證大鼠肺組織JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，以揭示毒素清治療肺炎痰熱證的作用機(jī)制。
　　 方法：清潔級wistar大鼠70只，雌雄各半，2月齡，200±20g，按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，即正常組、肺炎組、肺炎痰熱證組、對照組、毒素清組，每組14只。采用氣管插管法制作細(xì)菌性肺炎模型，在細(xì)菌性肺炎模型基礎(chǔ)上給予熱環(huán)境風(fēng)熱刺激建立細(xì)菌性肺炎痰熱證模型。毒素清組第7天開始給予毒素清水溶劑(2.8g·kg-·d

2、-1)灌胃，每日一次，連續(xù)5天；對照組第7天開始給予清金化痰湯合桑白皮湯中藥水煎劑(5 607g·k-1·d-1)港胃，每日一次，連續(xù)5天；正常組、肺炎組、肺炎痰熱證組第7天開始給予相同體積的生理鹽水灌胃，每日一次，連續(xù)5天。所有動物于風(fēng)熱刺激開始第11天取材。光鏡下觀察大鼠病理形態(tài)學(xué)改變，采用免疫組化法測定各組肺組織IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α的表達(dá)及JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白p—JAK2、p—STAT1、p—

3、STAT3、SOCS3表達(dá)，采用RT-PCR法測定肺組織IL-1mRNA、IL-10mRNA及SOCS3mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1各組大鼠外周血白細(xì)胞(white blood cell，WBC)計數(shù)和中性粒細(xì)胞(polymorphonuelear neutropuk，PMN)百分比變化：肺炎組、肺炎痰熱證組WBC和PMN百分比均較正常組升高(P<0.01)。肺炎痰熱證組WBC計數(shù)和FMN百分比較肺炎組升高

4、(P<0.01，P<0.05)；毒素清組、對照組WBC計數(shù)和PMN百分比均低于肺炎痰熱證組(P<0.01，P<0.05)，毒素清組較對照組降低，但無顯著差異。
　　 2各組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變；正常組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常。肺炎組細(xì)支氣管腔及肺泡腔內(nèi)炎性滲出明顯，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血、出血，中性粒細(xì)胞彌漫浸潤。肺炎痰熱證組細(xì)支氣管及肺泡腔膿性滲出明顯，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，間質(zhì)水腫，毛細(xì)血管增生、擴(kuò)張、充血。對照組細(xì)支氣管及肺泡腔內(nèi)炎性滲

5、出明顯減少，間質(zhì)輕度水腫，局部毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血，炎癥細(xì)胞散在分布。毒素清組肺組織結(jié)構(gòu)基本正常，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤。
　　 3各組大鼠肺組織IL-1β蛋白爰IL-1βmRNA表達(dá)的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織IL-1β蛋白及IL—1βmRNA的表達(dá)顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組IL-1β蛋白及IL-1βmRNA的表達(dá)較肺炎組有增強的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)：與肺炎痰熱證組相比，毒素清組與

6、對照組肺組織IL-1蛋白及IL-1βmRNA的表達(dá)明顯減弱(P<0.01)，其中，毒素清組較對照組IL-1蛋白及IL-1βmRNA的表達(dá)減弱明顯(P<0.05)。 4各組大鼠肺組織TNF表達(dá)的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織TNF表達(dá)顯著增強(O<0.01)，其中，肺炎痰熱證組肺組織TNF表達(dá)較肺炎組增強明顯(P<0.01)；與肺炎痰熱證組相比，毒素清組與對照組肺組織TNF表達(dá)明顯降低(P<0.01)，其中，毒素清組較對照

7、組肺組織TNF的表達(dá)降低顯著(P<0.05)。
　　 5各組大鼠肺組織IL-6表達(dá)的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織IL-6表達(dá)顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組肺組織IL-6表達(dá)較肺炎組增強明顯(P<0.05)；與肺炎痰熱證組相比，毒素清組與對照組肺組織IL-6表達(dá)顯著降低(P<0.01)，其中，毒素清組較對照組肺組織IL-6表達(dá)降低明顯(P<0.05)。
　　 6各組大鼠肺組織IL-10蛋白及

8、IL-10mRNA表達(dá)的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織IL-10蛋白及IL-10mRNA的表達(dá)顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組IL-10蛋白及IL-10mRNA的表達(dá)較肺炎組增高(P<0.05)；與肺炎痰熱證組相比，毒素清組肺組織IL-10蛋白及IL-10mRNA的表達(dá)明顯增強(P<0.05)。
　　 7各組大鼠肺組織p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表達(dá)的變化：與正常組比較，肺炎組和肺

9、炎痰熱證組肺組織p-JAK2、 p-STAT1、p-STAT3蛋白表達(dá)均顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組較肺炎組增強明顯(P<0.05);與肺炎痰熱證組比較，毒素清組和對照組的上述蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.01)，其中，毒素清組鞍對照組降低更明顯(P<0.05)。
　　 8各組大鼠肺組織SOCS3蛋白及SOCS3mRNA表達(dá)的變化：與正常組比較，肺炎組和肺炎痰熱證組肺組織SOC83蛋白及SOCS3mRNA的表達(dá)顯著

10、增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組SOCS3蛋白及SOCS3mRNA的表達(dá)較肺炎組增強明顯(P<0.05);與肺炎痰熱證組比較，毒素清組和對照組肺組織SOCS3蛋白及SOCS3mRNA的表達(dá)水平均明顯提高(P<0.01)，其中，毒素清組表達(dá)水平均數(shù)較對照組升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1采用細(xì)菌性肺炎結(jié)合熱環(huán)境風(fēng)熱刺激的方法成功制備細(xì)菌性肺炎痰熱證模型。該病證結(jié)合模型在白細(xì)胞反應(yīng)、炎癥細(xì)胞因子表達(dá)及J

11、AK/STAT信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)方面有其自身的病理生理特點。
　　 2促炎性園子與抗炎性因子之間的失衡及JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了肺炎痰熱證的發(fā)生發(fā)展。
　　 3毒素清對肺炎痰熱證模型炎癥損傷具有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能為：
　　 ①直接抑制促炎因子TNF-α、IL-1β及IL-6的過度釋放。②促進(jìn)抗炎因子IL-10的分泌，協(xié)調(diào)促炎反應(yīng)與抗炎反應(yīng)的平衡。③影響JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，繼而下調(diào)下游炎癥因子