結(jié)核分枝桿菌喹諾酮類耐藥基因的研究.pdf

1、研究背景與目的:結(jié)核病是一種對(duì)人類影響嚴(yán)重的傳染性疾病，2006年全球有180萬人死于結(jié)核病，920萬人成為新發(fā)結(jié)核病患者。該病需要較長(zhǎng)時(shí)間的藥物聯(lián)合治療才能治愈，但目前能用于該病治療的藥物有限，而且隨著耐藥結(jié)核病特別是耐多藥結(jié)核病的出現(xiàn)，結(jié)核病控制工作和公共健康安全正遭受越來越嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。
　　 作為廣譜的抗生素，喹諾酮類藥物逐漸被用于結(jié)核病的治療，并有可能作為一線藥物使用。不幸的是，隨著該類藥物的廣泛使用及不同程度的濫用和誤

2、用，對(duì)該類藥物耐受的結(jié)核分枝桿菌（MTB）開始出現(xiàn)并逐漸增多?，F(xiàn)有的研究已經(jīng)證實(shí)gyrA基因和gyrB基因的突變是MTB喹諾酮類耐藥的主要分子機(jī)制，但各研究者所發(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)及突變頻率尚存在差異，因此需要進(jìn)一步的研究來深入分析MTB的喹諾酮類耐藥機(jī)制。
　　 本研究通過檢測(cè)耐喹諾酮類結(jié)核分枝桿菌臨床菌株gyrA基因和gyrB基因的突變類型和突變頻率，分析突變類型與耐藥水平之間的關(guān)系，闡述gyrA基因和gyrB基因突變?cè)诮Y(jié)核分枝桿

3、菌喹諾酮類耐藥中作用。
　　 方法:
　　 從肺結(jié)核患者的痰液中分離出67株MTB臨床菌株，采用絕對(duì)濃度法測(cè)定MTB臨床菌株對(duì)左氧氟沙星（LVX）的敏感性，并應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和DNA直接測(cè)序（DS）技術(shù)檢測(cè)其gyrA基因和gyrB基因的突變情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.64株MTB臨床LVX耐藥菌株有47株gyrA基因序列發(fā)生突變，突變率為73.4％。其中42株低濃度耐藥菌株有27株存在突變，

4、突變率為64.3％；22株高濃度耐藥菌株有20株發(fā)生突變，突變率為90.9％。47株gyrA基因突變菌株中，其中45株為單位點(diǎn)突變，另2株為雙位點(diǎn)突變。單位點(diǎn)突變發(fā)生在70位、89位、90位、91位和94位，雙位點(diǎn)突變發(fā)生在90位+94位，94位為突變頻率最高的位點(diǎn)，占總例數(shù)的63.8％。具體的突變類型包括H70R、D89N、A90V、S91A、D94G、D94A、D94N等7種單位點(diǎn)突變和1種A90V+D94A雙位點(diǎn)突變。其中，H70

5、R、D89N單位點(diǎn)突變和A90V+D94A雙位點(diǎn)突變均只導(dǎo)致高濃度耐藥，而其它突變類型即可致低濃度耐藥也可引起高濃度耐藥。
　　 2.64株LVX耐藥MTB臨床菌株中，僅有1株發(fā)生gyrB基因突變，為Thr511Asn突變。
　　 結(jié)論:
　　 gryA基因和gyrB基因的突變是MTB喹諾酮類耐藥的主要分子機(jī)制，其不同的突變類型可導(dǎo)致不同程度的耐藥水平改變。但是，gryA基因和gyrB基因的突變并不能解釋所有MT