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文檔簡介
1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長因子mRNA在原發(fā)性食管癌中的表達(dá)和臨床意義姓名：崔肅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：陳東義2002.3.1患者的癌組織和24例癌旁6era以上的正常食管組織，手術(shù)切除后立即送至一80。C深低溫冰箱中凍存。所有病例術(shù)前均未發(fā)現(xiàn)有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，未行放療和化療，術(shù)后均有病理證實(shí)。36個(gè)病例中男性24例，女性12例；小于60歲的20例，大于等于60歲的16例；平均年齡593歲(范圍33—78歲)；均為鱗
2、癌；TNM分期I期14例，Ⅱ期13例，Ⅲ期9例；其中18例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。2試劑：RNA提取試劑TRIzol購自GIBCOBRL公司；TaKaRaRNAPCRKit(AMV)V21購自寶生物(大連)工程有限公司；RT—PCR引物由上海Sangon生物工程公司合成；pGEM一3Zf()DNA／HaVⅢMarkers購自華美生物工程公司；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。3主要儀器設(shè)備：超聲粉碎機(jī)(CPS一1型，上海超聲波儀器廠)；臺式高速低溫離心機(jī)(
3、DUPONTSUPER一2型，美國Sorvall公司)；紫外分光光度計(jì)(UV一260型，Et本Shimadzu公司)；多功能電泳儀(MultiphorII型，瑞典PharmaciaBioteeh公司)；BiometraUnioII型PCR儀(德國)；凝膠自動(dòng)成象及分析系統(tǒng)(UPv，USA)。實(shí)驗(yàn)方法1總mRNA提?。簠⒄誘RIzol說明書分別提取食管癌組織和癌旁正常食管組織的總RNA。具體步驟為：剪碎的食管癌組織和癌旁正常食管組織各10
4、0rag用lmlTRIzol試劑勻漿，加200出氯仿快速震蕩15sec，室溫放置5rain，4。C離心120009，15min。取上清加入500一異丙醇，冰上沉淀3h以上，4℃離心120009，10rain，棄上清，沉淀經(jīng)lml75％乙醇洗一次，4。C離心75009，5rain，棄上清，最后用適量的無Rnase水溶解RNA沉淀，用紫外分光光度計(jì)測定0D瑚和OD瑚，計(jì)算RNA純度(OD獅／0D瑚)和濃度(0D260稀釋倍數(shù)x40／1000
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