外周血淋巴細(xì)胞中谷胱甘肽含量變化與輻射劑量的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:當(dāng)人體受到輻射時(shí),可產(chǎn)生大量的活性氧(reactive oxygen species,ROS)和自由基(free radical,FR),細(xì)胞內(nèi)的還原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)抗氧化系統(tǒng)能夠有效清除輻射所引起的ROS和FR,降低射線對(duì)細(xì)胞的損傷作用。本研究觀察外周血淋巴細(xì)胞中GSH含量變化與輻射劑量之間的相關(guān)性,并建立GSH含量與輻射劑量之間的劑量-效應(yīng)曲線,從而在職業(yè)受照射人員體檢及輻射應(yīng)急事故

2、中,更快地進(jìn)行生物劑量估算,并能夠?qū)Σ煌椛鋼p傷程度的人群進(jìn)行分類。
　　方法:選取淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)在正常范圍內(nèi)的健康成人血標(biāo)本120份,中位年齡42歲,男女比例為31:29,離體時(shí)間不超過4h,分成5個(gè)劑量組,每組24份血標(biāo)本,給予直線加速器6MV-X線,源皮距(source skin distance,SSD)100cm,劑量建成1.5cm,分別照射0Gy、1Gy、2Gy、3Gy、5Gy,照射后2小時(shí),利用淋巴細(xì)胞分離液提取出淋巴

3、細(xì)胞,再利用谷胱甘肽試劑盒檢測(cè)淋巴細(xì)胞中的總谷胱甘肽(total glutathione,T-GSH)、氧化性谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)以及GSH的含量,比較不同劑量照射后,淋巴細(xì)胞中GSH含量的差異,并建立劑量-效應(yīng)曲線,觀察GSH的含量與輻射劑量之間的相關(guān)性。此外,同一血標(biāo)本在X線照射后,加入帶有植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)的RPMI-1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),37℃

4、培養(yǎng)44h,加入秋水仙素阻滯細(xì)胞的有絲分裂,繼續(xù)培養(yǎng)至52h,收獲中期分裂相細(xì)胞。經(jīng)低滲、預(yù)固定、固定、離心、制片后讀片,每張片子觀察100個(gè)細(xì)胞,數(shù)出其中的雙著絲粒數(shù),計(jì)算出雙著絲粒染色體畸變率。微核實(shí)驗(yàn)為同一血標(biāo)本經(jīng)X線照射后,加入帶有PHA的RPMI培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)40h后,加入松胞素-B(Cytochalasin B),繼續(xù)培養(yǎng)至72h收獲,經(jīng)低滲、固定、制片、Giemsa染色后讀片,每張片子觀察500個(gè)雙核細(xì)胞,數(shù)出其中的微

5、核數(shù),計(jì)算出每個(gè)劑量組的微核形成率。
　　結(jié)果:GSH含量與輻射劑量之間呈直線負(fù)相關(guān),劑量-效應(yīng)曲線擬合公式為y=-0.59x+5.97,R2=0.95。GSH/GSSG比值與輻射劑量之間呈三次函數(shù)變化趨勢(shì),劑量-效應(yīng)曲線擬合公式為y=-0.08x3+0.82x2-2.78x+4.69，R2=0.98。五個(gè)劑量組的染色體畸變率分別為0,10.08％,41.17%,73.08%,207.42%,與輻射劑量之間關(guān)系呈二次函數(shù)變化趨勢(shì),

6、劑量-效應(yīng)曲線擬合公式為y=7.78x2+2.28x+0.64,R2=0.9984。五個(gè)劑量組的微核形成率分別為1.7‰,43.5‰,84.4‰,197.2‰,478.8‰,與輻射劑量之間關(guān)系亦呈二次函數(shù)變化趨勢(shì),劑量-效應(yīng)曲線公式為y=15.9x2+16.3x+0.55,R2=0.9981。且GSH含量與雙著絲粒染色體畸變率之間存在相關(guān)性,r=0.966;GSH含量與微核率之間存在相關(guān)性,r=0.968。
　　結(jié)論:GSH含量與