酸棗仁皂苷A引起的腸道和主要臟腑之間的信息交流.pdf

1、酸棗仁作為國(guó)家頒布的第一批藥食同源食品之一,具有養(yǎng)心補(bǔ)肝,寧心安神,斂汗,生津的功效,主要用于治療虛煩不眠,驚悸多夢(mèng)、體虛多汗,津傷口渴等癥。酸棗仁皂苷A是酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠的主要活性成分,其作用機(jī)理尚待進(jìn)一步研究。腸道是人體的一個(gè)重要器官,研究表明其含有多種受體并可分泌多種細(xì)胞因子,在調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫及信息傳遞中發(fā)揮重要的生理作用。本文研究了酸棗仁皂苷A在體內(nèi)各個(gè)組織中的分布情況,考察了酸棗仁皂苷A對(duì)于大鼠海馬細(xì)胞GABA受體表達(dá)的影響,并

2、利用細(xì)胞因子來(lái)探討腸道與各個(gè)臟腑之間的信號(hào)交流關(guān)系,為更好、更全面、更準(zhǔn)確的研究酸棗仁皂苷A鎮(zhèn)靜催眠作用機(jī)理提供依據(jù),主要研究結(jié)果如下:
　　應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS/MS)測(cè)定大鼠血漿及心、肝、脾、肺、腎、胃、腦、腸組織中酸棗仁皂苷A的含量,確定藥物在大鼠體內(nèi)主要組織中的分布情況。結(jié)果表明,2 mg/kg的劑量對(duì)大鼠靜脈注射后,酸棗仁皂苷A在體內(nèi)迅速分布,各個(gè)組織中的酸棗仁皂苷A在20-2000ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)

3、系均良好,r>0.9990,提取回收率>80％。精密度均小于15%,可于體內(nèi)組織分布的測(cè)定。經(jīng)過(guò)檢測(cè)酸棗仁皂苷A在腸組織中的藥物濃度最高(2930.20±518.96 ng/mL),腦組織中最少(144.27±22.31ng/mL),依次分布情況:腎臟>脾臟>肝臟>肺>胃>心臟>肌肉。組織中的藥物濃度均隨時(shí)間的延長(zhǎng)而降低,在體內(nèi)未見(jiàn)有明顯的特殊積蓄現(xiàn)象,藥物在檢測(cè)時(shí)間內(nèi)于4h時(shí)降至較低水平。
　　以神經(jīng)元微管蛋白-2(MAP-2)

4、作為神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物,運(yùn)用免疫熒光技術(shù)對(duì)體外元代培養(yǎng)的海馬細(xì)胞進(jìn)行純度鑒別。以海馬細(xì)胞作為模型,通過(guò)用高、中、低三種不同濃度的酸棗仁皂苷A作用海馬細(xì)胞,以細(xì)胞存活率為考察指標(biāo),考察酸棗仁皂苷A對(duì)海馬細(xì)胞的生長(zhǎng)作用。結(jié)果表明,海馬細(xì)胞呈綠色熒光且特征明顯,純度較好。不同濃度酸棗仁皂苷A(0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)作用海馬細(xì)胞24h后,與空白對(duì)照組相比,低、中、高三個(gè)劑量的酸棗仁皂苷A的細(xì)胞存活率均大于1

5、00%,25μg/mL組P>0.05,50μg/mL和100μg/mL組P<0.05,有顯著差異,證明在在該濃度下的酸棗仁皂苷A具有促進(jìn)海馬細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
　　利用熒光定量PCR技術(shù),考察棗仁皂苷 A對(duì)于SD大鼠海馬細(xì)胞 GABA受體mRNA表達(dá)的影響。與空白對(duì)照組比較酸棗仁皂苷A作用細(xì)胞48h后,25μg/mL組GABAAα1、GABAAα5、GABABR1受體 mRNA(relative toβ-Actin)表達(dá)量顯著升高(

6、P<0.05),GABAAβ1表達(dá)量降低(P<0.05)。50μg/mL和100μg/mL組 GABAAα1、GABABR1、GABAAα5和GABAAβ1受體mRNA表達(dá)量均顯著升高(P<0.05),不同濃度同一受體的基因表達(dá)量但之間存在一定的劑量相關(guān)性。與藥物作用48h相比,50μg/mL的酸棗仁皂苷 A作用海馬細(xì)胞24h后,GABAAα1受體 mRNA表達(dá)量升高(P<0.01),GABABR1、GABAAα5表達(dá)量降低(P<0.0

7、5),均具有顯著性。GABAAα1和GABAAβ1受體mRNA的表達(dá)量趨勢(shì)相同。然而,GABABR1、GABAAα5受體mRNA的表達(dá)量是隨藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而升高,顯示出一定的時(shí)效關(guān)系。酸棗仁皂苷A和地西泮分別作用海馬細(xì)胞24h,其受體基因表達(dá)水平高于地西泮,酸棗仁皂苷A可能在發(fā)揮鎮(zhèn)鎮(zhèn)靜催眠作用時(shí)較地西泮更加迅速有效。
　　用液體芯片技術(shù)對(duì)細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè),考察腸道與臟腑之間的信息交流關(guān)系。實(shí)驗(yàn)中通過(guò)對(duì)細(xì)胞因子的檢測(cè),尋找細(xì)胞因

8、子的表達(dá)分泌細(xì)胞和靶細(xì)胞,根據(jù)其相互作用關(guān)系做出細(xì)胞和細(xì)胞之間的作用關(guān)系表,以此表繪制出細(xì)胞通訊網(wǎng)絡(luò)圖,從而直觀地顯示出腸道與臟腑之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,腸道在受到酸棗仁皂苷A刺激后,會(huì)在空白培養(yǎng)上清液中分泌細(xì)胞因子,繼而這些釋放在培養(yǎng)液中的細(xì)胞因子(經(jīng)循環(huán)系統(tǒng))傳遞到其他臟腑組織調(diào)節(jié)相應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌,并通過(guò)計(jì)算得到腸道對(duì)各個(gè)臟腑組織作用的強(qiáng)弱關(guān)系為:心>脾>腦>肝>肺>胃>腎。細(xì)胞因子是腸道和臟腑發(fā)生聯(lián)系的重要信號(hào)分子,通過(guò)