文昌魚谷丙轉氨酶組織定位及在LPS和溶藻弧菌處理后急性炎癥相關因子的變化.pdf

1、機體在受到外傷、炎癥和病原感染時，機體發(fā)生廣泛的生理反應，反應原激活機體的神經(jīng)內分泌系統(tǒng)，釋放兒茶酚胺(catecholamines，CAs)等一系列激素，從而引起機體的急性時相反應(acute phase response，APR)。使機體產(chǎn)生急性時相蛋白(acute phase protein，APPs)等炎癥標志物。 我們首先利用免疫組化和Western blotting方法，研究了AAT在文昌魚的組織表達和定位，首次在頭

2、索動物文昌魚中證明了AAT的存在，結果顯示，AAT定位于文昌魚肝盲囊的細胞漿內，從AAT在文昌魚中的合成部位來看，在功能上文昌魚的肝盲囊等同于脊椎動物肝臟，肝盲囊是在發(fā)育分化過程中消化道組織向右前方突出沿著咽后部向前擴展和延伸形成的一個囊袋狀結構。長期以來，文昌魚的肝盲囊被認為是脊椎動物肝臟的前體，支持了由Muller最早提出的脊椎動物的肝臟是由文昌魚肝盲囊進化而來的觀點。 第二，我們用生物化學方法，選取典型的炎性刺激因子-LP

3、S來感染文昌魚，探討了文昌魚體液中的谷丙轉氨酶(Alanine aminotransferase，AAT)、谷草轉氨酶(Aspartate transaminase，AST)、谷氨酰轉肽酶(r-Glutamyltransferase，GGT)、乳酸脫氫酶(Lactare dehydrogenase，LDH)、羥丁酸脫氫酶(α-HydroxybutyrateDehydrogenase，HBDH)、視黃醇結合蛋白(Retinol Bindi

4、ng Protein，RBP)和堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)七種炎性蛋白的急性時相反應，其中，首次在文昌魚體液中發(fā)現(xiàn)了AAT、AST、GGT、LDH、HBDH和RBP六種炎性蛋白存在，并發(fā)現(xiàn)，LPS感染文昌魚后，在不同時間文昌魚體液中所含七種蛋白呈現(xiàn)了各自不同的變化趨勢，總蛋白濃度在整個實驗期內保持了基本恒定的水平，而AAT、AST、GGT、LDH、HBDH和ALP六種蛋白在實驗周期內總體呈上升的趨勢，

5、其濃度均明顯增加，呈正急性時相反應；而RBP實驗周期內總體呈下降的趨勢，呈負急性時相反應。這都表明：無論正急性時相蛋白還是負急性時相蛋白，在文昌魚體內都呈現(xiàn)了類似高等哺乳動物急性時相反應特點。因此，我們認為類似哺乳類具有的急性時相反應體系已經(jīng)存在于頭索類動物中了。 第三，我們用生物化學方法，選取海洋中廣泛存在、眾多水產(chǎn)動物的常見致病菌-溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)作為天然反應原感染文昌魚，從另外一個角度探

6、討并豐富文昌魚體液中的八種炎性蛋白的急性時相反應，結果顯示，與LPS感染文昌魚相比，六種正APPs的濃度變化幅度相對較小，曲線相對平緩，但仍然呈正急性時相反應，蛋白電泳也證實了這一點；而二種負APPs：RBP和白蛋白(Albumin，ALB)濃度實驗周期內總體呈下降的趨勢，呈負急性時相反應，結論與上述LPS相同。 第四，我們用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)

7、，探討了LPS感染文昌魚兒茶酚胺類(CAs)神經(jīng)遞質的變化，優(yōu)化了同時測定文昌魚體液中NE、E和DA三種CAs的HPLC方法，并首次發(fā)現(xiàn)，文昌魚體液中同時存在NE、E、和DA三種CAs物質，其中，E在文昌魚中首次報道，這三種物質在LPS感染文昌魚后濃度升高非常明顯，與同期的APPs相比變化更為迅速，也體現(xiàn)了神經(jīng)遞質的主導作用，文昌魚的CAs系統(tǒng)也具有了類似脊椎動物CAs系統(tǒng)的功能，可以初步判斷CAs系統(tǒng)的進化源頭由脊椎動物可推回到頭索類