茜草有效部位體內(nèi)分布及有效成分對(duì)CYP2E1影響的研究.pdf

1、本論文共由四章組成,第一章對(duì)茜草石油醚部位進(jìn)行血清藥物化學(xué)研究,分析了茜草石油醚部位中有效成分在家兔體內(nèi)的吸收和代謝情況。第二章采用 HPLC的方法對(duì)RMC在大鼠體內(nèi)的代謝情況分析研究。第三章用探針?biāo)幬锓▽?duì)RMC在體外對(duì)大鼠肝微粒體CYP2E1酶活性的影響進(jìn)行研究。第四章對(duì)天然產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞色素P450酶活性影響研究的進(jìn)展進(jìn)行了綜述。
　　第一章茜草石油醚部位血清藥物化學(xué)研究
　　健康家兔禁食12 h后以0.2 g·mL-1茜草

2、石油醚部位制成的灌胃液灌胃,灌胃劑量為5 mL·100 g-1,在灌胃前和灌胃后15 min、30 min、60 min、90 min、120 min分別采血3 mL,血清預(yù)處理后過(guò)0.45μm濾膜,經(jīng)HPLC分析,采用Purospher STAR RP-18柱(4.6 mm×250 mm,5μm,Merk);流動(dòng)相為甲醇-水-四氫呋喃(90:9.3:0.7);體積流量1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm;柱溫25℃;進(jìn)樣量

3、10μL。經(jīng)分析,15 min時(shí)RMC已吸收入血,30 min時(shí)已代謝,90 min時(shí)可能有其他物質(zhì)代謝生成RMC,120 min代謝完畢。
　　第二章 RMC在大鼠體內(nèi)代謝研究
　　健康 SD大鼠禁食12 h后尾靜脈注射1.75 mg·mL-1RMC溶液,注射劑量為0.2 mL·100g-1,分別在注射前和給藥后5 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90 min、120 min、180 min

4、、240 min斷尾取血,經(jīng)血清預(yù)處理后過(guò)0.45μm濾膜,經(jīng)HPLC分析,采用Purospher STAR RP-18柱(4.6 mm×250 mm,5μm,Merk);流動(dòng)相為甲醇-水-四氫呋喃(90:9.3:0.7);體積流量1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm;柱溫25℃;進(jìn)樣量10μL。高效液相檢測(cè)均沒(méi)有在血清中檢測(cè)到RMC,推測(cè)RMC吸收代謝迅速,5分鐘時(shí)已經(jīng)代謝完畢。
　　第三章 RMC對(duì)大鼠肝細(xì)胞CYP

5、2E1酶活性影響研究
　　健康大鼠禁食12 h,處死后取出肝臟,沖洗干凈后用超速離心法制備肝微粒體,用考馬斯亮藍(lán)測(cè)定所制備肝微粒體蛋白濃度后進(jìn)行孵育。反應(yīng)體系總體積為500μL,體系中分別含有肝微粒體80μL,5.0 mmol·L-1 MgCl2溶液,探針?biāo)幬?.7 mg·mL-1對(duì)硝基苯酚溶液1μL,實(shí)驗(yàn)組加樣品1mg·mL-1RMC10μL,空白組加等體積PBS緩沖液。混旋后放入37℃預(yù)孵育5 min,加入1 mmol·L-1

6、NADPH啟動(dòng)反應(yīng)。30 min、60 min后分別取出各實(shí)驗(yàn)組和空白組加入500μL冰冷的甲醇溶液終止反應(yīng),渦旋混勻,離心,取上清液過(guò)0.45μm濾頭,取續(xù)濾液HPLC進(jìn)樣。采用Purospher STAR RP-18柱(4.6 mm×250 mm,5μm,Merk),流動(dòng)相為1％醋酸乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液20:80;體積流量1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm;柱溫25℃;進(jìn)樣量10μL。結(jié)果顯示,3