中藥有效成分對(duì)CaCCs通道調(diào)節(jié)功能的研究.pdf

1、鈣激活氯通道（CaCCs）廣泛存在于各種生物體內(nèi)，參與包括跨上皮細(xì)胞離子的轉(zhuǎn)運(yùn)、嗅覺(jué)的傳導(dǎo)、平滑肌的收縮、痛覺(jué)的感受、視覺(jué)信號(hào)的轉(zhuǎn)化、控制神經(jīng)元的興奮等多種生理活動(dòng)。CaCCs發(fā)生異常會(huì)導(dǎo)致如高血壓、干燥綜合征、氣道高反應(yīng)、肺囊性纖維化等疾病，并與多種腫瘤的演化發(fā)展有關(guān)，已成為重要的藥物靶點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究確定了TMEM16A/B是CaCCs的分子基礎(chǔ)，緩解乃至于治療CaCCs相關(guān)疾病，都需要尋找調(diào)節(jié)通道活性的物質(zhì)。中醫(yī)理論與中藥在中華

2、民族千年發(fā)展歷程中的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)是民族智慧與艱苦實(shí)踐的結(jié)晶，蘊(yùn)含著豐富的科學(xué)內(nèi)涵。從中藥有效成分中尋找CaCCs的靶向藥物，不僅能夠節(jié)省遴選時(shí)間，還能豐富中藥科學(xué)內(nèi)容，促進(jìn)中醫(yī)藥學(xué)的現(xiàn)代化。本研究主要采用膜片鉗電生理技術(shù)和熒光顯微成像技術(shù)對(duì)中藥有效成分進(jìn)行篩選，以期找到天然產(chǎn)物中的CaCCs靶向藥物。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過(guò)查閱治療相關(guān)疾病的中藥典籍，確定了東莨菪內(nèi)酯、水蘇堿、白藜蘆醇、大黃酸、芍藥苷、槲皮素、罌粟堿、黃連素等

3、多種中藥有效成分作為候選藥物，通過(guò)黃色熒光（EYFP）的篩選，初步確定了白藜蘆醇和大黃素對(duì)TMEM16A離子通道具有調(diào)節(jié)作用。⑵為了明確白藜蘆醇和大黃素是否可以升高胞內(nèi)鈣離子濃度，我們采用Ca2+染料Fluo-3 AM測(cè)定給藥前后HEK-293細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明了白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+沒(méi)有影響，而大黃素能夠促使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度升高，有趣的是，大黃素還抑制了ATP升高胞內(nèi)鈣的活動(dòng)。⑶為了進(jìn)一步檢驗(yàn)白藜蘆醇和大黃素是否可以直

4、接激活 TMEM16A通道，我們采用膜片鉗內(nèi)面向外模式，研究結(jié)果顯示白藜蘆醇可以使通道電流變大，但大黃素對(duì)通道電流無(wú)影響。結(jié)合共聚焦與熒光實(shí)驗(yàn)證據(jù)，得出以下結(jié)論：白藜蘆醇能夠直接與TMEM16A/B通道相互作用，激活通道；大黃素是通過(guò)升高胞內(nèi)鈣離子濃度而間接激活TMEM16A通道的。⑷在器官水平，白藜蘆醇能夠激活回腸上的TMEM16A通道促進(jìn)腸道肌肉收縮，并且這種活動(dòng)能夠被CaCC通道抑制劑CaCCinh-A01所抑制。⑸為了探究白藜蘆