核糖體蛋白質(zhì)L15（RPL15）的高表達(dá)促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的增殖.pdf

1、背景: 胃癌是世界范圍內(nèi)第二常見的癌癥死亡原因。環(huán)境和遺傳因素在胃癌發(fā)生中都是很重要的因素。近年來，關(guān)于胃癌的分子特征的了解越來越多。同源染色體1，5，7，12，13和17位上雜合性的缺失(LOH)在胃癌中經(jīng)常出現(xiàn)。基因的變化，致癌基因的激活和腫瘤抑制基因的失活在胃癌中經(jīng)常可見。致癌基因c-ras，c-erbB-2，K-sam，c-met和c-myc的突變或者擴(kuò)增以及腫瘤抑制基因p53，結(jié)腸腺瘤息肉基因(APC)，結(jié)直腸癌刪除基

2、因(DCC)和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因(RBI)的失活被認(rèn)為與胃癌的發(fā)生有關(guān)。這些基因可能是潛在的預(yù)測胃癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的預(yù)后指標(biāo)。 近來的研究顯示基因表達(dá)模式的綜合分析能從正常胃粘膜中識別胃癌的新的分子。這項(xiàng)技術(shù)也用來鑒別腫瘤亞群和鑒定與疾病分類、早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)后以及胃癌進(jìn)展有關(guān)的基因的表達(dá)。核糖體蛋白質(zhì)是核糖體的組成成分，在DNA修復(fù)、凋亡、耐藥、增殖中顯示了不同的功能。在我們以前的研究中，我們比較了兩種胃癌組織和同質(zhì)的非腫瘤組織中基因

3、的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)RPL15的表達(dá)水平在胃癌組織中比對照分別增加了2.8和4.7倍。RPL15還顯示在一些食管腫瘤中也比正常同質(zhì)組織中高表達(dá)。所以研究RPL15是否在胃癌中真正高表達(dá)和其在胃癌惡性表型中的作用是有意義的。在研究中，我們利用我們自己制備的多克隆抗體檢測了RPL15在胃癌組織和胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)，探討了RPL15表達(dá)對于胃癌細(xì)胞系SGC7901的增殖的影響。 方法: 我們購買了Cybrdi公司的組織標(biāo)本做RPL1

4、5的免疫染色，標(biāo)本包括23張正常胃粘膜、胃腺癌和臨近的非腫瘤組織的切片。我院普外科12名手術(shù)患者的胃癌和臨近的非腫瘤組織用來做Westernblotting檢測。我們構(gòu)建了pSilencer-RPL15A和pSilencer-RPL15B質(zhì)粒，并用pSilencer-RPL15A，pSilencer-RPL15B或者空載體pSilencer3.1轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞，分別指定為SGC7901-L15AsiRNA，SGC7901-L15

5、BsiRNA和SGC7901-pcDNA。通過westernblot分析轉(zhuǎn)染后SGC7901細(xì)胞中RPL15水平，通過MTT和流式細(xì)胞分析研究了轉(zhuǎn)染pSilencer-RPL15A后SGC7901細(xì)胞的增殖情況。并通過Westernblot研究細(xì)胞周期蛋白D1和B1與RPL15異位表達(dá)的關(guān)系。我們還通過軟瓊脂克隆基因分析和裸鼠皮下致瘤試驗(yàn)評價(jià)了轉(zhuǎn)染后SGC7901細(xì)胞體內(nèi)外致腫瘤性的變化。 結(jié)果: RPL15在胃癌組織中

6、顯著地高表達(dá)，而且RPL15在胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS，MKN45，MKN28，SGC7901和KATOⅢ中也高表達(dá)。通過轉(zhuǎn)染siRNA載體抑制RPL15的表達(dá)明顯地抑制了SGC7901細(xì)胞的生長，而且和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白D1和B1的表達(dá)無關(guān)。下調(diào)RPL15的表達(dá)抑制了SGC7901細(xì)胞在軟瓊脂的生長和在裸鼠皮下的致腫瘤性。 結(jié)論: RPL15在胃癌組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，在胃癌細(xì)胞的增殖中發(fā)揮著作用。所以RPL15可能是胃癌抗癌治