天花粉蛋白與核糖體蛋白L10a及細(xì)胞質(zhì)膜蛋白的結(jié)合研究.pdf

1、天花粉蛋白是一種Ⅰ型核糖體失活蛋白，具有多種生物學(xué)活性。本文用天花粉蛋白親和層析柱分離到一個結(jié)合蛋白，通過質(zhì)譜鑒定為核糖體蛋白L10a。體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組的核糖體蛋白L10a能夠與天花粉蛋白特異的結(jié)合。表面等離子共振實(shí)驗(yàn)顯示天花粉蛋白與核糖體蛋白L10a之間具有較高的親和性：解離平衡常數(shù)為7.78nM。天花粉蛋白突變體的研究進(jìn)一步表明這種特異結(jié)合與天花粉蛋白的核糖體失活活性相關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)對于理解天花粉蛋白失活核糖體以及其發(fā)揮生物學(xué)活性

2、的機(jī)制提供了新的思路。 天花粉蛋白用于中期流產(chǎn)具有很高的成功率(94﹪)和很低的副作用。這種流產(chǎn)作用可能是通過天花粉蛋白直接和特異的損傷人胎盤合胞體滋養(yǎng)層細(xì)胞而進(jìn)行的。MTT實(shí)驗(yàn)顯示人絨毛膜癌細(xì)胞對天花粉蛋白具有極高的敏感性，同時(shí)天花粉蛋白能夠誘導(dǎo)人絨毛膜癌細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度波動和凋亡。放射配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示天花粉蛋白與人絨毛膜癌細(xì)胞的結(jié)合具有明顯的飽和性，表現(xiàn)為雙位點(diǎn)結(jié)合特性：一個高親和性結(jié)合位點(diǎn)(Bmax1=10，351±24

3、00sites/cell，Kd1=0.2358±0.1nmol/L)和一個低親和性結(jié)合位點(diǎn)(Bmax2=102，037±31，500sites/cell，Kd2=10.41±3nmol/L)。流式細(xì)胞儀也證實(shí)了這種特異結(jié)合。使用生物素標(biāo)記人絨毛膜癌細(xì)胞的表面蛋白，通過固定化的親和素親和純化增溶的生物素化的膜蛋白以及天花粉蛋白親和膠體pull-down實(shí)驗(yàn)鑒定到兩個天花粉蛋白結(jié)合蛋白(50kDa，60kDa)，這兩個蛋白顯示出具有與Con