供者特異性輸注聯合地塞米松延長小鼠皮膚移植物存活的研究.pdf

1、目的：探討供者脾細胞特異性輸注聯合地塞米松誘導移植物長期存活的機理。 方法：1.體內實驗：建立Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠皮膚移植模型。實驗組：受者移植前8天給予Balb/c裸鼠脾細胞尾靜脈輸注并于次日開始給予地塞米松Dex腹腔注射(10mg/kg/day)，共7天，給藥結束后行皮膚移植；對照組：受者移植前8天給予Balb/c裸鼠脾細胞尾靜脈輸注后，未進行任何處理即行皮膚移植。流式細胞術(FACS)分別檢測地塞米松處理7

2、天后以及移植后7天受者脾淋巴細胞CD4+CD25+調節(jié)性T細胞比例和凋亡細胞比例的改變，并采用HE染色組織病理學觀察術后7天移植皮片的病理表現，以及觀測移植皮片存活時間。2.體外實驗：單向混合淋巴細胞培養(yǎng)(MLC)。實驗組：絲裂霉素C處理后失去增殖活性的Balb/c(H-2d)小鼠脾細胞作為刺激細胞，體內實驗中的實驗組Dex處理7天和皮膚移植后7天的脾細胞分別作為反應細胞；對照組：絲裂霉素C處理后失去增殖活性的Balb/c(H-2d)小

3、鼠脾細胞作為刺激細胞，正常C57BL/6小鼠(H-2b)的脾細胞作為反應細胞，體外混合培養(yǎng)48小時后，采用AlamarBlue染色法檢測同種抗原刺激后脾細胞增殖活性變化。 結果：預致敏并給予7天地塞米松后，經過48h單向混合淋巴細胞培養(yǎng)，實驗組反應細胞對Balb/c同種抗原的增殖率為18.52±2.81％，顯著低于對照組的29.18+5.53％(P＜0.05)。實驗組反應細胞中CD4+CD25+Treg比例為3.62±0.66％

4、，顯著高于對照組的2.22±0.29％(P＜0.05)；凋亡細胞比例為38.29±1.73％，顯著高于對照組的23.18±1.32％(P＜0.05)。移植后7天體外混合淋巴細胞培養(yǎng)后實驗組受鼠脾細胞對Balb/c同種抗原的增殖率為25.07±0.62％，顯著低于對照組的34.29±0.94％(P＜0.05)。移植皮膚發(fā)生排斥反應后，實驗組受鼠脾淋巴細胞中CD4+CD25+Treg的比例為3.39±0.21％，高于對照組的1.57±0.3

5、％(P＜0.05)；凋亡細胞的比例為17.43±2.26％，高于對照組的13.11±2.09％(P＜0.05)。取移植皮片組織病理學檢測顯示，實驗組移植皮片淋巴細胞浸潤程度明顯輕于對照組，組織結構基本完整。本方案處理后移植皮片平均存活時間(MST)為19.27±1.68天，顯著長于對照組的11.56±1.19天(n=6)，(P＜0.05)。 結論：供者脾細胞特異性輸注聯合地塞米松通過清除同種反應性T細胞克隆，誘導受者脾淋巴細胞中