供者特異性輸注聯(lián)合地塞米松延長小鼠皮膚移植物存活的研究.pdf

1、目的：探討供者脾細胞特異性輸注聯(lián)合地塞米松誘導(dǎo)移植物長期存活的機理。 方法：1.體內(nèi)實驗：建立Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠皮膚移植模型。實驗組：受者移植前8天給予Balb/c裸鼠脾細胞尾靜脈輸注并于次日開始給予地塞米松Dex腹腔注射(10mg/kg/day)，共7天，給藥結(jié)束后行皮膚移植；對照組：受者移植前8天給予Balb/c裸鼠脾細胞尾靜脈輸注后，未進行任何處理即行皮膚移植。流式細胞術(shù)(FACS)分別檢測地塞米松處理7

2、天后以及移植后7天受者脾淋巴細胞CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞比例和凋亡細胞比例的改變，并采用HE染色組織病理學(xué)觀察術(shù)后7天移植皮片的病理表現(xiàn)，以及觀測移植皮片存活時間。2.體外實驗：單向混合淋巴細胞培養(yǎng)(MLC)。實驗組：絲裂霉素C處理后失去增殖活性的Balb/c(H-2d)小鼠脾細胞作為刺激細胞，體內(nèi)實驗中的實驗組Dex處理7天和皮膚移植后7天的脾細胞分別作為反應(yīng)細胞；對照組：絲裂霉素C處理后失去增殖活性的Balb/c(H-2d)小

3、鼠脾細胞作為刺激細胞，正常C57BL/6小鼠(H-2b)的脾細胞作為反應(yīng)細胞，體外混合培養(yǎng)48小時后，采用AlamarBlue染色法檢測同種抗原刺激后脾細胞增殖活性變化。 結(jié)果：預(yù)致敏并給予7天地塞米松后，經(jīng)過48h單向混合淋巴細胞培養(yǎng)，實驗組反應(yīng)細胞對Balb/c同種抗原的增殖率為18.52±2.81％，顯著低于對照組的29.18+5.53％(P＜0.05)。實驗組反應(yīng)細胞中CD4+CD25+Treg比例為3.62±0.66％

4、，顯著高于對照組的2.22±0.29％(P＜0.05)；凋亡細胞比例為38.29±1.73％，顯著高于對照組的23.18±1.32％(P＜0.05)。移植后7天體外混合淋巴細胞培養(yǎng)后實驗組受鼠脾細胞對Balb/c同種抗原的增殖率為25.07±0.62％，顯著低于對照組的34.29±0.94％(P＜0.05)。移植皮膚發(fā)生排斥反應(yīng)后，實驗組受鼠脾淋巴細胞中CD4+CD25+Treg的比例為3.39±0.21％，高于對照組的1.57±0.3

5、％(P＜0.05)；凋亡細胞的比例為17.43±2.26％，高于對照組的13.11±2.09％(P＜0.05)。取移植皮片組織病理學(xué)檢測顯示，實驗組移植皮片淋巴細胞浸潤程度明顯輕于對照組，組織結(jié)構(gòu)基本完整。本方案處理后移植皮片平均存活時間(MST)為19.27±1.68天，顯著長于對照組的11.56±1.19天(n=6)，(P＜0.05)。 結(jié)論：供者脾細胞特異性輸注聯(lián)合地塞米松通過清除同種反應(yīng)性T細胞克隆，誘導(dǎo)受者脾淋巴細胞中