輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的供體特異性骨髓間質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠異體肢移植特異性免疫耐受.pdf

1、目的：探討經(jīng)尾靜脈輸注含細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4)分子胞外段與人IgG恒定區(qū)重組的融合蛋白（CTLA4-Ig）的重組腺病毒轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠同種異體肢體移植免疫耐受的可能性及其機(jī)理，為臨床肢體移植誘導(dǎo)免疫耐受提供新的思路和方法。
　　 方法：(1)采用Adeasy同源重組腺病毒載體系統(tǒng)，構(gòu)建攜帶融合基因CTLA4-Ig的重組腺病毒，測(cè)定滴度;并用其轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)外源基因CTLA

2、4-Ig的表達(dá)。(2)構(gòu)建肢體移植大鼠模型，隨機(jī)分為A、B、C、D四組。A組:空白對(duì)照組; B組:靜脈注射BMSCs;C組:靜脈注射AdCTLA4-Ig;D組:靜脈注射AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMSCs。檢測(cè)移植肢體發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí)間、存活時(shí)間;觀測(cè)移植肢體皮膚病理形態(tài)學(xué)改變，ELISA方法檢測(cè)移植大鼠細(xì)胞因子IL-2的水平變化。
　　 結(jié)果：(1)成功構(gòu)建了攜帶基因CTLA4Ig的重組腺病毒，滴度為1.0*109efu/ml，

3、并能有效感染骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，使骨髓間質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CTLA4Ig。(2)肢體移植物存活時(shí)間，空白對(duì)照組、輸注AdCTLA4Ig、輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMSCs組分別為7.20±0.45d、10.04±0.55d、10.04±0.55d、19.40±1.14d。各治療組移植物存活時(shí)間均顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(P＜0.05);輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMSCs組植物存活時(shí)間均顯著長(zhǎng)于輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-

4、Ig組;輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組無明顯差別。(3)肢體移植物排斥反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間，空白對(duì)照組、輸注AdCTLA4Ig、輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMSCs組分別為4.40±0.55d、7.20±0.45d、7.20±0.45d、14.40±0.55d。各治療組移植物存活時(shí)間均顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(P＜0.05);輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMSCs組植物存活時(shí)間均顯著長(zhǎng)于輸注BMSCs、輸注AdCTLA4

5、-Ig組;輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組無明顯差別。(4)肢體移植術(shù)后5天細(xì)胞因子IL-2水平，空白對(duì)照組、輸注BMSCs、輸注AdCTLA4Ig、輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMSCs組分別為159.83±9.85pg/ml、119.54±13.46pg/ml、118.79±12.88pg/ml、64.32±15.24pg/ml。各治療組移植物存活時(shí)間均顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(P＜0.05);輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMS

6、Cs組植物存活時(shí)間均顯著長(zhǎng)于輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組;輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組無明顯差別。(5)肢體移植術(shù)后5天移植肢體皮膚病理檢查，空白對(duì)照組可見重度淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);輸注BMSCs和輸注AdCTLA4-Ig組可見中度淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);輸注AdCTLA4-Ig轉(zhuǎn)染的BMSCs組可見輕度淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 結(jié)論：(1)采用Adeasy同源重組腺病毒載體系統(tǒng)，可快速、簡(jiǎn)便獲取高滴度的重組腺病毒AdCT