輸注AdCTLA4-Ig轉染的供體特異性骨髓間質干細胞誘導大鼠異體肢移植特異性免疫耐受.pdf

1、目的：探討經尾靜脈輸注含細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(CTLA4)分子胞外段與人IgG恒定區(qū)重組的融合蛋白（CTLA4-Ig）的重組腺病毒轉染的骨髓間充質干細胞誘導大鼠同種異體肢體移植免疫耐受的可能性及其機理，為臨床肢體移植誘導免疫耐受提供新的思路和方法。
　　 方法：(1)采用Adeasy同源重組腺病毒載體系統(tǒng)，構建攜帶融合基因CTLA4-Ig的重組腺病毒，測定滴度;并用其轉染骨髓間充質干細胞，RT-PCR檢測外源基因CTLA

2、4-Ig的表達。(2)構建肢體移植大鼠模型，隨機分為A、B、C、D四組。A組:空白對照組; B組:靜脈注射BMSCs;C組:靜脈注射AdCTLA4-Ig;D組:靜脈注射AdCTLA4-Ig轉染的BMSCs。檢測移植肢體發(fā)生排斥反應時間、存活時間;觀測移植肢體皮膚病理形態(tài)學改變，ELISA方法檢測移植大鼠細胞因子IL-2的水平變化。
　　 結果：(1)成功構建了攜帶基因CTLA4Ig的重組腺病毒，滴度為1.0*109efu/ml，

3、并能有效感染骨髓間質干細胞，使骨髓間質干細胞表達CTLA4Ig。(2)肢體移植物存活時間，空白對照組、輸注AdCTLA4Ig、輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig轉染的BMSCs組分別為7.20±0.45d、10.04±0.55d、10.04±0.55d、19.40±1.14d。各治療組移植物存活時間均顯著長于對照組(P＜0.05);輸注AdCTLA4-Ig轉染的BMSCs組植物存活時間均顯著長于輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-

4、Ig組;輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組無明顯差別。(3)肢體移植物排斥反應出現(xiàn)時間，空白對照組、輸注AdCTLA4Ig、輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig轉染的BMSCs組分別為4.40±0.55d、7.20±0.45d、7.20±0.45d、14.40±0.55d。各治療組移植物存活時間均顯著長于對照組(P＜0.05);輸注AdCTLA4-Ig轉染的BMSCs組植物存活時間均顯著長于輸注BMSCs、輸注AdCTLA4

5、-Ig組;輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組無明顯差別。(4)肢體移植術后5天細胞因子IL-2水平，空白對照組、輸注BMSCs、輸注AdCTLA4Ig、輸注AdCTLA4-Ig轉染的BMSCs組分別為159.83±9.85pg/ml、119.54±13.46pg/ml、118.79±12.88pg/ml、64.32±15.24pg/ml。各治療組移植物存活時間均顯著長于對照組(P＜0.05);輸注AdCTLA4-Ig轉染的BMS

6、Cs組植物存活時間均顯著長于輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組;輸注BMSCs、輸注AdCTLA4-Ig組無明顯差別。(5)肢體移植術后5天移植肢體皮膚病理檢查，空白對照組可見重度淋巴細胞浸潤;輸注BMSCs和輸注AdCTLA4-Ig組可見中度淋巴細胞浸潤;輸注AdCTLA4-Ig轉染的BMSCs組可見輕度淋巴細胞浸潤。
　　 結論：(1)采用Adeasy同源重組腺病毒載體系統(tǒng)，可快速、簡便獲取高滴度的重組腺病毒AdCT