環(huán)磷酰胺預(yù)處理、短程環(huán)孢素A聯(lián)合骨髓腔內(nèi)輸注供者骨髓誘導(dǎo)大白兔特異性免疫耐受的研究.pdf

1、【目的】通過(guò)對(duì)受者環(huán)磷酰胺預(yù)處理、短程環(huán)孢素A應(yīng)用及供者骨髓細(xì)胞、供受者融合后骨髓細(xì)胞骨髓腔內(nèi)輸注，觀察對(duì)移植皮膚存活的影響，進(jìn)而探索一種適合臨床應(yīng)用的誘導(dǎo)免疫耐受的方法。【材料與方法】雌、雄性新西蘭大白兔各36只，15-20周齡，重2.0-2.5Kg，購(gòu)自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心，飼養(yǎng)于南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院動(dòng)物房。雄性作為供者，雌性作為受者，隨機(jī)配對(duì)，將36對(duì)大白兔再隨機(jī)分為6組：即空白對(duì)照組、單純預(yù)處理組、單純骨髓輸注組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)

2、驗(yàn)2組、無(wú)關(guān)供體對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)l組應(yīng)用環(huán)磷酰胺100mg/kg/d(-4-3d)、環(huán)孢素A(10mg/kg/d(-1-+10d)+供者造血干細(xì)胞骨髓腔內(nèi)輸注組(骨髓單個(gè)核細(xì)胞4×10<'8>)，實(shí)驗(yàn)2組應(yīng)用環(huán)磷酰胺100mg/kg/d(-4——3d)、環(huán)孢素A(10mg/kg/d(-1—+10d)+供、受體融合后骨髓細(xì)胞骨髓腔內(nèi)輸注。各組在輸注骨髓的同一天進(jìn)行皮膚移植，觀察移植皮膚存活時(shí)間、對(duì)第三者皮膚的排斥反應(yīng)及對(duì)供體的單向混合淋巴細(xì)胞

3、反應(yīng)，并用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)Y染色體特有的性別決定基因(SRY)以證實(shí)嵌合體的形成?！窘Y(jié)果】(1)單純骨髓細(xì)胞輸注組和單純低劑量預(yù)處理+環(huán)孢素A組在移植后30天均檢測(cè)不到供受者混合嵌合體，移植皮膚的存活時(shí)間分別為11.33±0.82天、16.33±1.21天；聯(lián)合應(yīng)用低劑量的預(yù)處理、短程免疫抑制劑和供者骨髓細(xì)胞輸注組在移植后30天可檢測(cè)到供受者混合嵌合體，移植皮膚存活時(shí)間為44.67±3.20天；供受者融合細(xì)胞輸注組移植皮膚存活

4、時(shí)間為39.67±1.21天，骨髓移植后30天可檢測(cè)到嵌合體。實(shí)驗(yàn)1組皮膚存活時(shí)間(44.67±3.20天)、實(shí)驗(yàn)2組(39.67±1.21天)比空白對(duì)照組(10.83±0.75天)、單純預(yù)處理組(16.83±1.21)、單純骨髓輸注組(11.33±0.82天)、無(wú)關(guān)供體±1.47天)明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。 (2)供者骨髓細(xì)胞輸注與供、受者融合后骨髓細(xì)胞輸注比較，移植皮膚生存期無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(3)耐受誘導(dǎo)20天時(shí)，

5、第四、第五組受者對(duì)供者淋巴細(xì)胞的單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)較移植前特異性降低，A490值分別為(0.41±0.063)、(0.45±0.019)，移植前為(1.44±0.041)，對(duì)無(wú)關(guān)第三者的反應(yīng)性為(1.35±0.680)，移植后與移植前及無(wú)關(guān)第三者相比較，差異均有顯著性(P<0.01)，移植前與無(wú)關(guān)第三者比較無(wú)顯著差異(P>0.05)?！窘Y(jié)論】1、在大白兔動(dòng)物模型中，采用環(huán)磷酰胺預(yù)處理、短程環(huán)孢素A免疫抑和輸注供者骨髓細(xì)胞能誘導(dǎo)供受者造