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文檔簡介
1、目的:
本研究基于建立大鼠永久性大腦中動脈閉塞(MCAO)缺血模型,通過應(yīng)用神經(jīng)功能行為學(xué)評分、腦組織TTC染色及病理學(xué)觀察對大鼠腦缺血模型給予評價,探索局灶性腦缺血后大鼠腦組織中解偶聯(lián)蛋白5(uncoupling protein5,UCP5)的表達(dá)情況,以進(jìn)一步探討腦梗塞后腦損傷的可能機(jī)制。
方法:
選用健康雄性Sprague-Dawley大鼠,體重250g~300g,運(yùn)用血管內(nèi)栓線方法制作大鼠左側(cè)MCA
2、O腦缺血模型。實驗動物隨機(jī)(隨機(jī)數(shù)字法)分為假手術(shù)對照組(n=7)和缺血組(n=60),缺血組又分為5個缺血亞組:缺血6小時組(n=12)、缺血12小時組(n=12)、缺血1天組(n=12)、缺血3天組(n=12)及缺血7天組(n=12),缺血組于SD大鼠術(shù)后清醒(術(shù)后3小時)行神經(jīng)功能行為學(xué)評分,如有造模不成功或死亡,則隨機(jī)補(bǔ)充。分別從假手術(shù)對照組及5個缺血亞組(缺血6小時、12小時、1天、3天、7天)中隨機(jī)抽取2只SD大鼠進(jìn)行斷頭處
3、理,快速取出腦組織,切片后置于2%的2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)中染色,以觀察腦組織梗塞灶,各組其余SD大鼠均斷頭處理后完整取出腦組織,經(jīng)多聚甲醛溶液浸泡固定后制作石蠟切片,然后行HE染色及免疫組織化學(xué)染色以觀察大腦腦梗塞后腦組織細(xì)胞病理學(xué)變化及UCP5的表達(dá)情況。
結(jié)果:
1、冠狀位腦切片經(jīng)TTC染色后,正常腦組織顯示鮮紅色,梗死區(qū)腦組織顯示蒼白色,在假手術(shù)組中未見蒼白色梗死灶,在腦缺血6小時組、12小時
4、組、1天組、3天組、7天組中均可見蒼白色梗死區(qū)域。
2、HE染色顯示在假手術(shù)組中未見腦組織結(jié)構(gòu)及神經(jīng)元異常改變,在腦缺血6小時組、12小時組、1天組、3天組、7天組SD大鼠梗塞灶側(cè)腦組織中可見壞死區(qū)域,缺血中心區(qū)的神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞等正常組織結(jié)構(gòu)消失,細(xì)胞出現(xiàn)腫脹,核碎裂等現(xiàn)象;位于缺血半影區(qū)的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞可見細(xì)胞變性及數(shù)目減少,胞質(zhì)可呈嗜酸性改變及神經(jīng)基質(zhì)腫脹等現(xiàn)象。
3、UCP5在腦缺血6小時組、12小時組、1
5、天組、3天組、7天組中均檢測到陽性表達(dá);在假手術(shù)組中偶見少量陽性表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞。腦缺血6小時組、12小時組、1天組、3天組、7天組分別與假手術(shù)對照組進(jìn)行比較,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,缺血各組UCP5陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)明顯高于假手術(shù)對照組,具有顯著差異(P<0.001)。
4、在腦缺血6小時組、12小時組、1天組、3天組、7天組之間進(jìn)行兩兩比較,結(jié)果示缺血6小時組腦組織UCP5表達(dá)升高,缺血12小時組腦組織UCP5表達(dá)繼續(xù)增高,于缺血1天組UC
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