葉酸對局灶性腦梗塞大鼠腦組織Notch信號通路作用的研究.pdf

1、目的：研究葉酸(folic acid，FA)對成年局灶性腦梗塞大鼠腦組織Notch信號通路相關基因和蛋白表達的影響，在分子水平上探討葉酸防治腦梗塞的作用及其作用機制。 方法：本實驗采用成年SD大鼠48只，按體重隨機分為假手術組(sham operationgroup，SO)，大腦中動脈閉塞模型組(middle cerebral artery occlusion，MCAO)，MCAO+葉酸低劑量組(MCAO+low dose fo

2、lic acid，MCAO+LFA)，MCAO+葉酸高劑量組(MCAO+high dose folic acid，MCAO+HFA)，每組12只。其中SO組和MCAO組灌胃生理鹽水10ml/(kg bw·d)，MCAO+LFA組和MCAO+HFA組分別灌胃葉酸溶液4mg/(kg bw·d)，12mg/(kg bw·d)。預防性補充葉酸28d后，除SO組外其他三組均采用線栓法制備左側腦梗塞模型。補充葉酸前、補充28d后及腦梗塞后采取血清，

3、化學發(fā)光免疫分析法測定血清中葉酸含量；模型建立24h后進行神經功能評分，每組各取3只大鼠斷頭取腦TTC染色測定腦梗塞體積；其余腦梗塞大鼠繼續(xù)補充葉酸3d、7d、14d后斷頭處死，取出腦組織制作冰凍切片，HE染色觀察腦梗塞后3d腦組織病理學變化；熒光原位雜交法測定各時間點Notch信號通路Noch1、Hes1、Hes5、Mash1、Neurogenin1、Neurogenin2mRNA的表達水平；Western blot法測定各時間點No

4、tch1、Hes1、Hes5蛋白的表達水平。 結果：腦梗塞模型建立后存活大鼠除SO組外均出現左側Homer征，神經功能評分在1～3分之間，達到了模型成功標準。血清中葉酸含量測定結果顯示：MCAO組于腦梗塞后低于SO組，葉酸補充28d及腦梗塞3d后MCAO組低于MCAO+LFA和MCAO+HFA組，且MCAO+LFA組低于MCAO+HFA組(P<0.05)，每組腦梗塞前后比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TTC染色顯示：MC

5、AO組大鼠腦梗塞體積比值明顯高于MCAO+LFA和MCAO+HFA組(P<0.05)；HE染色顯示：SO組神經細胞排列整齊，形態(tài)完整；MCAO組梗塞區(qū)廣泛的神經細胞壞死，細胞間隙變寬，排列紊亂，胞體縮小變形，染色加深，葉酸補充組神經細胞壞死及腦組織變性較MCAO組輕；熒光原位雜交結果顯示：大鼠腦梗塞后補充葉酸3dNotch信號通路相關基因已經開始表達。其中Notch1，Hes5mRNA的表達于梗塞7d達到高峰，14d下降，HeslmRN

6、A在三個時間點間的表達呈上升趨勢。三種基因陽性細胞熒光強度，各時間點SO組均低于MCAO組(P<0.05)；7d、14d點MCAO組低于MCAO+LFA組和MCAO+HFA組(P<0.05)，MCAO+LFA組低于MCAO+HFA組(P<0.05)。Mash1，Neurogenin1，Neurogenin2mRNA表達于梗塞后7d下降，14d上升。各時間點陽性細胞熒光強度：Mash1基因MCAO組與SO組、MCAO+LFA組、MCAO+

7、HFA組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；3d、14d點MCAO+LFA組高于MCAO+HFA組(P<0.05)。Neurogenin1基因3d、14d點MCAO組高于MCAO+LFA組，各時間點均高于MCAO+HFA組(P<0.05)；7d、14d點MCAO+LFA組均高于MCAO+HFA組(P<0.05)。Neurogenin2基因3d、14d點SO組均低于MCAO組(P<0.05)；14d點MCAO組高于MCAO+LFA組(

8、P<0.05)，各時間點兩組均高于MCAO+HFA組(P<0.05)。Westernblot結果顯示：Notch1，Hes1，Hes5蛋白的表達趨勢與其相應基因表達完全相同。三種蛋白表達量，7d、14d點MCAO組均低于MCAO+LFA組和MCAO+HFA組(P<0.05)；7d、14d點Notch1，Hes1蛋白MCAO+LFA組低于MCAO+HFA組；7d點Hes5蛋白表達MCAO+LFA組低于MCAO+HFA組(P<0.05)。