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1、目的:金雀異黃酮(Genistein,Gs)是一種具有多種藥理學(xué)作用的植物雌激素;研究發(fā)現(xiàn)它能通過(guò)激活核受體而調(diào)節(jié)多種藥物代謝酶的表達(dá)。尿二苷葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)是生物體內(nèi)最重要的Ⅱ相藥物代謝酶,它能代謝許多種內(nèi)外源性物質(zhì)。本課題的研究目的是探討Gs對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞株UGT1A、UGT2B及其它們的同工型酶的誘導(dǎo)作用及其機(jī)制。 方法:將HepG2細(xì)胞分成6組,即空白組、陽(yáng)性對(duì)照組及四個(gè)Gs濃度組(1-10μM);分別
2、于加藥后12h、24h及36h收集細(xì)胞。提取總RNA用半定量RT-PCR分別檢測(cè)PPARα、UGT1A及其同工型UGT1A1和UGT1A9、UGT2B及其同工型UGT284mRNA的表達(dá);提取微粒體蛋白用Western印跡檢測(cè)UGT1A蛋白表達(dá)。 結(jié)果:(1)在實(shí)驗(yàn)劑量下,Gs在給藥后12-36h對(duì)UGT1A1及UGT2BmRNA僅有輕微的誘導(dǎo)作用,與空白對(duì)照組相比沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。Gs在12h時(shí)對(duì)UGT1A及UGT1A9mR
3、NA的上調(diào)作用最明顯,與空白組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);另外,此時(shí)UGT1AmRNA表達(dá)量與Gs劑量呈顯著正相關(guān)(r=0.781,P=0.01)。Gs在24h對(duì)PPARα及UGT284mRNA的誘導(dǎo)作用最顯著,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外,在12-36h期間,PPAR α及UGT284mRNA表達(dá)量與Gs劑量呈顯著正相關(guān)。(2)Gs在12-36h能上調(diào)UGT1A蛋白的表達(dá),但在24h時(shí)作用最顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)PPAR α
4、mRNA與UGT1A9mRNA表達(dá)量無(wú)相關(guān)性(P>0.05),與UGT284mRNA量呈顯著正相關(guān)(r=0.568,P<0.01)。 結(jié)論:(1)1-10μM的Gs能誘導(dǎo)PPARα、UGT284、UGT1A及其同工型UGT1A9mRNA表達(dá),并能增加UGT1A蛋白表達(dá)。(2)PPAR α可能在Gs對(duì)UGT284表達(dá)調(diào)節(jié)中的作用明顯,即Gs可能通過(guò)激活PPARα而上調(diào)UGT284的表達(dá),而PPARα在Gs對(duì)UGT1A9表達(dá)調(diào)節(jié)中的
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