固本平喘湯對(duì)哮喘豚鼠氣道ECP、MBP影響的研究.pdf

1、[目的]在臨床應(yīng)用固本平喘湯防治支氣管哮喘并取得良好療效的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究該方對(duì)哮喘動(dòng)物模型氣道嗜酸性陽(yáng)離子蛋白(ECP)、堿性蛋白(MBP)以及嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)的影響，探討固本平喘湯治療支氣管哮喘的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 [方法]體重250-300g豚鼠60只，雌雄各30只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、西藥對(duì)照(地塞米松)組(C組)、中藥小劑量治療組(D1組)、中藥大劑量治療組(D2組)

2、，每組12只。造模采用Underwood法[1]加以改進(jìn)，在實(shí)驗(yàn)第1天，給B、C、D1、D2每只豚鼠腹腔注射臨時(shí)配制OVA10mg加氫氧化鋁干粉100mg與滅活百日咳菌苗5×109個(gè)配制而成的混懸液1mL注射液以致敏，A組則以等量生理鹽水進(jìn)行腹腔注射；第15天將致敏豚鼠置于14升透明玻璃鐘罩內(nèi)，給予1％OVA對(duì)豚鼠進(jìn)行超聲霧化吸入(霧化量由小到大)激發(fā)15-20秒，然后自然吸入30min，每天1次，在激發(fā)前60min給予苯海拉明10mg

3、/kg腹腔注射，預(yù)防豚鼠因過(guò)敏反應(yīng)而死亡。A組則以等量生理鹽水進(jìn)行超聲霧化；即在每次激發(fā)時(shí)記錄其豚鼠一般情況。哮喘造模成功標(biāo)準(zhǔn)為：頭、面部搔癢，呼吸加深、加快、少動(dòng)，弓背，前肢縮抬，點(diǎn)頭呼吸，咳嗽，鼻煽，抽搐，呈哮喘樣表現(xiàn)。一般情況包括：精神、活動(dòng)、飲食、體重、排便、皮毛、病情以及死亡情況。此后，每天以1％OVA霧化誘喘，按最大霧化量，自然吸入30min，使哮喘反復(fù)發(fā)作，連續(xù)3天；在第一次誘喘后24小時(shí)，即從第16天開(kāi)始分別用軟管胃飼給

4、藥，A組及B組均予等體積胃飼生理鹽水，C組予地塞米松注射液(1mg/kg)胃飼；D1、D2組分別予固本平喘湯(炙麻黃、杏仁、甘草、蘇子、白芥子、萊菔子、黃芩、地龍、仙靈脾等組成)濃縮液(每毫升含生藥2g)D1組(2.5g/kg)及D2組(7.5g/kg)胃飼治療7天。觀察造模前后及藥物治療后豚鼠一般情況；療程結(jié)束后，處死動(dòng)物，收集各組動(dòng)物BALF、頸動(dòng)脈血及肺組織標(biāo)本，觀察BALF中細(xì)胞總數(shù)及細(xì)胞分類含量變化、肺組織形態(tài)及病理學(xué)改變，采

5、用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試法測(cè)定血清ECP含量，用HE染色觀察EOS情況，進(jìn)行支氣管平滑肌的MBPmRNART—PCR半定量分析。結(jié)果采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析處理；計(jì)數(shù)資料以—x±s表示，用t檢驗(yàn)比較。計(jì)量資料用X2檢驗(yàn)。 [結(jié)果]A組豚鼠體重自然增加，一般情況良好，無(wú)死亡。致敏后的豚鼠普遍精神較差，活動(dòng)減少，進(jìn)食及飲水量明顯下降。1-2天后逐漸恢復(fù)正常。第16天哮喘B組3只豚鼠，C組4只豚鼠，D1組2只豚鼠亦出現(xiàn)明

6、顯皮毛蓬松現(xiàn)象。第二次誘喘時(shí)，B組3只豚鼠哮喘發(fā)作嚴(yán)重后死亡。用藥后各組豚鼠情況均較哮喘模型組明顯改善，但不能恢復(fù)到A組的水平。D2組豚鼠肺組織血管損傷修復(fù)，肺泡間隔變窄，上皮增生明顯改善，炎癥細(xì)胞明顯減少，肺泡腔清晰。與B組比較，氣道炎性細(xì)胞侵潤(rùn)顯著減少，與C組相當(dāng)；BALF中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞侵潤(rùn)明顯減少，與B組比較有顯著性差異(P＜0.01)，與C組相當(dāng)(P＞0.05)；哮喘豚鼠血清ECP的分布明顯降低，與B組比較

7、亦有顯著性差異(P＜0.05)。治療前后MBPmRNA，與B組比較有顯著性差異(P＜0.01)。 [結(jié)論]固本平喘湯能誘導(dǎo)或促進(jìn)哮喘豚鼠氣道EOS減少，從而減輕氣道炎性細(xì)胞侵潤(rùn)，控制氣道慢性炎癥，以達(dá)到防治哮喘的目的。其作用機(jī)制可能是通過(guò)改變ECP及MBP在哮喘豚鼠肺組織的表達(dá)，及減少肺組織中ECP及MBP的含量，從而誘導(dǎo)EOS的凋亡，使BALF中及肺組織侵潤(rùn)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量顯著減少、淋巴細(xì)胞亦顯著減少，以達(dá)到防治哮喘的目的。