電針背六穴對(duì)哮喘豚鼠模型氣道重構(gòu)的干預(yù)機(jī)制研究.pdf

1、一、研究背景、目的與意義哮喘氣道的重構(gòu)是指廣泛的氣道結(jié)構(gòu)改變，如氣道壁的增厚、上皮層鱗狀上皮細(xì)胞的化生，杯狀細(xì)胞的增生，平滑肌的增生、肥厚，上皮下的纖維化等。氣道壁的增厚以及氣道平滑肌的增生、肥大等，導(dǎo)致了氣道的狹窄、氣流阻力的增加及氣道高反應(yīng)性。氣道重構(gòu)是氣道反復(fù)損傷與修復(fù)的結(jié)果，是造成不可逆轉(zhuǎn)的氣道阻塞的重要原因，是導(dǎo)致難治性支氣管哮喘臨床療效不佳的主要原因。針灸作為一種傳統(tǒng)的中醫(yī)療法，在治療支氣管哮喘有顯著的臨床療效。為探討針灸對(duì)

2、哮喘氣道重構(gòu)的可能干預(yù)機(jī)制，本研究從對(duì)氣道重構(gòu)干預(yù)作用的角度觀察電針背六穴(靳瑞教授臨床針灸療法精華——靳三針常用組穴法之一)對(duì)哮喘模型氣道重構(gòu)的氣道超微結(jié)構(gòu)的改變及對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-B(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)、白細(xì)胞介素-11(interleukin11，IL-11)、粒細(xì)胞-吞噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,G

3、M-CSF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(insulingrowthfactor1，IGF-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)的影響，為針灸治療哮喘及靳三針在臨床上的推廣運(yùn)用提供理論依據(jù)。 二、研究方法文獻(xiàn)研究綜述了中醫(yī)對(duì)哮喘病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)及其中藥、針灸治療方法；綜述了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)哮喘氣道重構(gòu)的發(fā)病和調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識(shí)以及哮喘氣道重構(gòu)的藥物治療，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行評(píng)述和展望。 實(shí)驗(yàn)

4、研究選擇豚鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。將豚鼠隨機(jī)分成4組：正常對(duì)照組、電針組、地塞米松組、模型組。造摸方法：第1天以10％(10g/100mL)卵清蛋白注射液腹腔注射1ml致敏，于第15天起隔天以1％(1g/100mL)卵蛋白溶液超聲霧化；隔天激發(fā)1次，共6周。干預(yù)治療采用電針背六穴(大杼、風(fēng)門(mén)、肺俞)。在每次超聲霧化激發(fā)前進(jìn)行，留針15min，隔天1次，共6周。治療結(jié)束后，光學(xué)顯微鏡下觀察各組豚鼠支氣管和肺組織的病理形態(tài)學(xué)改變、嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，并

5、進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)測(cè)量；采用電子顯微鏡觀察支氣管和肺組織的超微結(jié)構(gòu)；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)與氣道重構(gòu)相關(guān)的細(xì)胞因子TGF-β、GM-CSF、IGF-1和IL-11及MMP-9在各組支氣管和肺組織中的蛋白表達(dá)。 三、結(jié)果3.1文獻(xiàn)研究結(jié)果文獻(xiàn)研究表明，目前哮喘氣道重構(gòu)的機(jī)制尚未完全明了，但近年來(lái)的研究表明多種細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)和酶等參與了哮喘氣道重構(gòu)過(guò)程，它們通過(guò)作用于哮喘氣道內(nèi)的平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞等，導(dǎo)致平滑肌的增生

6、、肥厚，上皮下的纖維化等。關(guān)于其治療，主張?jiān)\斷一旦確立，即應(yīng)盡早開(kāi)始以皮質(zhì)激素為主的治療，以阻止重構(gòu)發(fā)生和肺功能不可逆損害。目前尚無(wú)其他特效藥。 3.2實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果(1)病理觀察結(jié)果顯示，模型組出現(xiàn)了哮喘氣道重構(gòu)的病理學(xué)改變，表現(xiàn)為主支氣管粘膜下結(jié)締組織內(nèi)灶狀慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管充血，腺體增生；肺泡內(nèi)可見(jiàn)彌漫性慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)、管腔變窄，肺泡基本上實(shí)變，充滿(mǎn)了炎癥細(xì)胞，說(shuō)明造模成功。激素組和電針組的肺組織也有不同程度的病變表現(xiàn)，但

7、都明顯輕于模型組。嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示模型組的支氣管肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)為(30.27±2.86)，顯著高于正常組的(1.00±0.27)，差異具有顯著性意義(P＜0.01)；電針組和地塞米松組的支氣管肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)都比模型組低，差異具有顯著性意義(P＜0.01)；與地塞米松組比，電針組的支氣管肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)略高(P＜0.05)。病理形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果表明，在大氣道，模型組氣道內(nèi)膜厚度、氣道纖維組織厚度高于正常組，差異具

8、有顯著性意義(P＜0.05)；電針組和地塞米松組的氣道內(nèi)膜厚度、氣道纖維組織厚度都比模型組低，差異具有顯著性意義(P＜0.05)；在小氣道，模型組氣道平滑肌厚度高于正常組，差異具有顯著性意義(P＜0.05)；電針組和地塞米松組的氣道平滑肌厚度都比模型組低，差異具有顯著性意義(P＜0.05)；電針組和地塞米松組在以上3個(gè)指標(biāo)中，差異無(wú)顯著性意義(P＞0.05)。 (2)電鏡觀察結(jié)果顯示，模型組支氣管上皮細(xì)胞纖毛有破壞，排列較正常組

9、紊亂，纖毛內(nèi)微小管閉塞，纖毛脫落壞死，纖毛較正常組變稀和變短；微絨毛也比正常組減少。支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞變性，線(xiàn)粒體腫脹，空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)部分?jǐn)U張成囊狀；支氣管上皮基細(xì)胞與表面的柱狀細(xì)胞之間的細(xì)胞間隙增寬，其中有大量嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)浸潤(rùn)；部分激活的嗜酸性粒細(xì)胞還可看到脫顆粒后形成的空泡而成為低密度嗜酸性粒細(xì)胞；上皮細(xì)胞間的橋粒連接破壞，空腔形成，上皮細(xì)胞的細(xì)胞核膜邊緣腫脹，雙層核膜之間的間隙增寬；基底膜不連續(xù)，膠原纖維增多，成纖維

10、細(xì)胞數(shù)量明顯增多。電針組和地塞米松組支氣管上皮細(xì)胞纖毛損傷較模型組明顯減輕，纖毛數(shù)目較多，排列也較整齊，纖毛閉塞壞死減少；仍可見(jiàn)EOS，但數(shù)量較模型組減少；細(xì)胞間的橋粒連接清晰，完整，無(wú)空腔形成；細(xì)胞核邊緣有輕微腫脹。但腫脹程度明顯比模型組減輕。細(xì)胞核膜間隙無(wú)明顯增寬；杯狀細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯增多，基底膜連續(xù)，無(wú)明顯的增厚，膠原纖維和成纖維細(xì)胞的數(shù)量無(wú)明顯增多。 (3)采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TGF-β1、GM-CSF、IGF-1和IL

11、-11及MMP-9的結(jié)果表明：模型組TGF-β1、GM-CSF、IGF-I陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于正常組，模型組TGF-β1、GM-CSF、IGF-I在支氣管肺組織中的表達(dá)與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；電針組與地塞米松組的支氣管肺組織TGF-B1、GM-CSF、IGF-I陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)低于模型組，電針組與地塞米松組TGF-β1、GM-CSF、IGF-I在支氣管肺組織中的表達(dá)與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組IL-11

12、、MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于正常組，模型組IL-11、MMP-9在支氣管肺組織中的表達(dá)與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；電針組與地塞米松組的支氣管肺組織IL-11、MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)低于模型組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 四、結(jié)論電針豚鼠背六穴(大杼、風(fēng)門(mén)、肺俞)能降低氣道重構(gòu)豚鼠模型支氣管肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，減輕氣道炎癥反應(yīng)；降低豚鼠大氣道的氣道內(nèi)膜厚度、氣道纖維組織厚度及小氣道的氣道平滑肌厚度，改善