平喘固本合劑對哮喘小鼠氣道慢性炎癥及重塑的影響及機制.pdf

1、目的：建立小鼠哮喘氣道重塑模型;初步探討平喘固本合劑對小鼠哮喘模型的氣道慢性炎癥及重塑的作用及相關(guān)機制,為防治哮喘氣道重塑提供新的研究依據(jù)。
　　 方法：健康雌性昆明系小鼠50只隨機分為五組,每組10只,正常對照組(A)、哮喘組(B)、平喘固本合劑干預(yù)組(C)、布地奈德霧化干預(yù)組(D)、聯(lián)合治療干預(yù)(E)。B、C、D、E組小鼠采用卵清白蛋白(OVA)和氫氧化鋁粉的復(fù)合制劑致敏、OVA霧化激發(fā)建立哮喘小鼠模型,并分別給予C、D、E

2、組不同干預(yù)治療。對各組支氣管肺泡灌洗液(BALF)中各種細胞進行分類并計數(shù),肺組織病理切片行HE染色后觀察氣道重塑情況并且采用Image-ProPlus6.0病理圖像分析軟件測定氣道管壁厚度及管壁面積,采用免疫組織化學(xué)法檢測核因子-κB(NF-κB)、血管內(nèi)皮轉(zhuǎn)化因子(VEGF)的表達水平。數(shù)據(jù)采用A_NOVA檢測進行組間分析,LSD檢驗進行組內(nèi)兩兩比較。
　　 結(jié)果：①A組小鼠無喘息癥狀;B組小鼠喘息癥狀明顯加重,且皮毛暗淡;

3、C、D、E組有喘息癥狀,但均較B組輕;②HE染色顯示所有藥物干預(yù)組較單純哮喘模型組炎癥細胞浸潤、平滑肌肥厚及黏膜氣道組織水腫、上皮細胞脫落等表現(xiàn)明顯減輕。其中以D和E組最為明顯;③B組BALF中細胞總數(shù),嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞比例均高于其他各組,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);A組低于其它各組,差別亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01.);C組與D組小鼠BALF中嗜酸性粒細胞數(shù)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.01)與哮喘B組相比明顯降低

4、,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)④圖像分析結(jié)果顯示,Wat/Pi(μm2/μm):各組氣道管壁的厚度分別為(6.61±1.14),(16.6±1.52),(11.57±1.26),(9.53±1.93),(8.56±1.35)μm2/μm,F=54.59,P＜0.01。A組顯著低于B組、C組、D組、E組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別等于0.000、0.000、0.000、0.012);C組高于D、E組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別等于0.0

5、09,0.000);D組與E組無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.193);B組顯著高于A組、C組、D組和E組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.000)。⑤小鼠肺組織免疫組化結(jié)果顯示,小鼠肺組織中VEGF陽性表達主要在氣管粘膜上皮、支氣管平滑肌、血管內(nèi)皮及血管平滑肌,炎性細胞(主要是嗜酸性粒細胞)也有表達。平均光密度(IOD)測定:分別為(11.57±1.64,35.87±4.92,28.28±2.02,25.06±2.58,16.31±2.41F=85

6、.45,P＜0.01),B組、C組、D組、E組中的VEGF光密度值均明顯高于A組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);B組的光密度值明顯高于C組、D組、E組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);D組的光密度值低于C組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.036);E組的光密度值明顯低于C組、D組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。NF-κB主要表達在氣道粘膜上皮細胞胞質(zhì)內(nèi),分別為(16.52±2.04,20.88±0.78,19.57±1.2

7、1,18.32±0.93,17.66±0.78,F=14.73,P＜0.01)B組、C組、D組的平均光密度值均明顯高于A組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);C組與D組、E組與A組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.53,0.76);B組的平均光密度值明顯高于C組、D組、E組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.042,0.000,0.000)。
　　 結(jié)論：運用OVA致敏及霧化的方法可以復(fù)制出慢性哮喘氣道重塑的小鼠模型;哮喘時NF-κB、VE