平喘固本合劑對(duì)哮喘小鼠氣道慢性炎癥及重塑的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：建立小鼠哮喘氣道重塑模型;初步探討平喘固本合劑對(duì)小鼠哮喘模型的氣道慢性炎癥及重塑的作用及相關(guān)機(jī)制,為防治哮喘氣道重塑提供新的研究依據(jù)。
　　 方法：健康雌性昆明系小鼠50只隨機(jī)分為五組,每組10只,正常對(duì)照組(A)、哮喘組(B)、平喘固本合劑干預(yù)組(C)、布地奈德霧化干預(yù)組(D)、聯(lián)合治療干預(yù)(E)。B、C、D、E組小鼠采用卵清白蛋白(OVA)和氫氧化鋁粉的復(fù)合制劑致敏、OVA霧化激發(fā)建立哮喘小鼠模型,并分別給予C、D、E

2、組不同干預(yù)治療。對(duì)各組支氣管肺泡灌洗液(BALF)中各種細(xì)胞進(jìn)行分類并計(jì)數(shù),肺組織病理切片行HE染色后觀察氣道重塑情況并且采用Image-ProPlus6.0病理圖像分析軟件測(cè)定氣道管壁厚度及管壁面積,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)核因子-κB(NF-κB)、血管內(nèi)皮轉(zhuǎn)化因子(VEGF)的表達(dá)水平。數(shù)據(jù)采用A_NOVA檢測(cè)進(jìn)行組間分析,LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組內(nèi)兩兩比較。
　　 結(jié)果：①A組小鼠無(wú)喘息癥狀;B組小鼠喘息癥狀明顯加重,且皮毛暗淡;

3、C、D、E組有喘息癥狀,但均較B組輕;②HE染色顯示所有藥物干預(yù)組較單純哮喘模型組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、平滑肌肥厚及黏膜氣道組織水腫、上皮細(xì)胞脫落等表現(xiàn)明顯減輕。其中以D和E組最為明顯;③B組BALF中細(xì)胞總數(shù),嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞比例均高于其他各組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);A組低于其它各組,差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01.);C組與D組小鼠BALF中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.01)與哮喘B組相比明顯降低

4、,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)④圖像分析結(jié)果顯示,Wat/Pi(μm2/μm):各組氣道管壁的厚度分別為(6.61±1.14),(16.6±1.52),(11.57±1.26),(9.53±1.93),(8.56±1.35)μm2/μm,F=54.59,P＜0.01。A組顯著低于B組、C組、D組、E組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別等于0.000、0.000、0.000、0.012);C組高于D、E組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別等于0.0

5、09,0.000);D組與E組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.193);B組顯著高于A組、C組、D組和E組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.000)。⑤小鼠肺組織免疫組化結(jié)果顯示,小鼠肺組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)主要在氣管粘膜上皮、支氣管平滑肌、血管內(nèi)皮及血管平滑肌,炎性細(xì)胞(主要是嗜酸性粒細(xì)胞)也有表達(dá)。平均光密度(IOD)測(cè)定:分別為(11.57±1.64,35.87±4.92,28.28±2.02,25.06±2.58,16.31±2.41F=85

6、.45,P＜0.01),B組、C組、D組、E組中的VEGF光密度值均明顯高于A組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);B組的光密度值明顯高于C組、D組、E組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);D組的光密度值低于C組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.036);E組的光密度值明顯低于C組、D組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。NF-κB主要表達(dá)在氣道粘膜上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),分別為(16.52±2.04,20.88±0.78,19.57±1.2

7、1,18.32±0.93,17.66±0.78,F=14.73,P＜0.01)B組、C組、D組的平均光密度值均明顯高于A組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);C組與D組、E組與A組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.53,0.76);B組的平均光密度值明顯高于C組、D組、E組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.042,0.000,0.000)。
　　 結(jié)論：運(yùn)用OVA致敏及霧化的方法可以復(fù)制出慢性哮喘氣道重塑的小鼠模型;哮喘時(shí)NF-κB、VE