芩丹膠囊逆轉(zhuǎn)自發(fā)性高血壓大鼠血管重構(gòu)的實驗研究.pdf

1、芩丹膠囊(Qindan Capsule，Qc)是臨床治療高血壓病的中藥復方制劑。本研究通過對自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneous hypertensive rat，SHR)動脈中膜病理改變及組織超微結(jié)構(gòu)的觀察，以及應用熒光實時定量PCR(real-time PCR)和Western blot檢測bFGF和OPN的mRN．A及蛋白表達的改變，探討芩丹膠囊逆轉(zhuǎn)高血壓血管重構(gòu)的機制，為其臨床防治高血壓病血管損害提供科學依據(jù)。 目的

2、 1．觀察芩丹膠囊對SHR大鼠血壓和血漿內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)、AngⅡ以及局部血管組織中AngⅡ的影響，探討芩丹膠囊的降壓機制。 2.觀察芩丹膠囊對SHR大鼠主動脈壁形態(tài)學及超微結(jié)構(gòu)的改變，以及對bFGF、OPN mRNA和蛋白的影響，探討芩丹膠囊逆轉(zhuǎn)高血壓血管重構(gòu)的機制。 結(jié)果 1.各組大鼠

3、治療前后收縮壓動態(tài)變化與14周齡正常血壓對照組WKY大鼠比較，14周齡SHR各組大鼠血壓已經(jīng)明顯升高(P<0.01)。SHR組大鼠收縮壓在實驗過程中呈持續(xù)升高狀態(tài)，與26周齡正常血壓的WKY組相比，26周齡SHR組大鼠收縮壓顯著增加(P<0.01)。從給藥第2周起，SHR+NJC組、SHR+CAP組、SHR+QCH組和SHR+QCL組大鼠收縮壓與SHR組相比均有下降(P均<0.01)。給藥6周后，SHR+QCH組大鼠收縮壓較SHR+QC

4、L組下降更為顯著(P<0.05或P<0.01)。給藥12周后，各給藥組大鼠收縮壓與SHR組相比均有明顯下降(P均<0.01)，但各組下降程度不同；其中SHR+QCL組下降程度最小，SHR+QCH組下降程度最大，兩組相比差異具有顯著性(P<0.05)。26周齡SHR+NJC組和SHR+CAP組大鼠收縮壓與同周齡SHR+QCH組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2．血漿ET-1、CGRP、Ang Ⅱ濃度比較(1)與26周齡正

5、常血壓對照組WKY大鼠相比，26周齡SHR組大鼠血漿ET-1濃度明顯增加(P<0.01)。各治療組大鼠血漿ET-1濃度較SHR組均有下降，其中SHR+QCH組下降最為顯著(P<0.05)。SHR+NJC組和SHR+CAP組雖也有下降，但與SHR組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。SHR+QCH組與SHR+CAP組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；SHR+QCH組與SHR+QCL組相比差異無顯著性(P>0.05)。 3

6、．血管組織中AngⅡ含量比較與26周齡正常血壓對照組WKY大鼠相比，26周齡SHR組大鼠血管組織中AngⅡ含量顯著升高(P<0.01)。SHR+NJC組與SHR組相比差異無顯著性(P>0.05)。26周齡SHR+CAP組、SHR+QCH組和SHR+QCL組大鼠血管組織中AngⅡ含量較SHR組相比顯著下降(P均<0.01)，且與SHR+NJC組相比差異具有顯著性(P均<0.01)。上述三組相比其差異無顯著性(P均>0.05)。 4

7、.主動脈壁切片光鏡下HE染色觀察對照組WKY大鼠胸主動脈血管壁內(nèi)膜、中膜、外膜三層結(jié)構(gòu)明顯，均無增厚；中膜VSMC細長呈梭形，細胞核藍染，呈同心圓狀排列整齊。SHR組大鼠主動脈壁增厚，中膜VSMC排列紊亂，單位面積細胞核數(shù)量增多。SHR+NJC組、SHR+CAP組、SHR+QCH組和SHR+QCL組大鼠主動脈壁均略有增厚，中膜VSMC排列欠規(guī)則，單位面積細胞核數(shù)目略增多。 5.主動脈形態(tài)學指標比較(1)與26周齡正常血壓對照組W

8、KY大鼠相比，26周齡SHR組大鼠主動脈MT明顯增加(P<0.01)。與SHR.組相比，SHR+NJC組大鼠主動脈MT略有下降(P<0.05)：SHR＋CAP組、SHR＋QCH組和SHR+QCL組則下降明顯(P均<0.01)，但三組之間差異無顯著性(P均>0.05)。 (2)與26周齡正常血壓對照組WKY大鼠相比，SHR組及各給藥組大鼠主動脈LD雖有不同程度下降，但差異無顯著性(P均>0.05)。 (3)與對照組WKY大

9、鼠相比，SHR組大鼠主動脈MT/LD顯著增加(P<0.01)。與SHR組相比，SHR+NJC組大鼠主動脈MT/LD雖有下降，但差異無顯著性(P>0.05)；SHR+CAP、SHR＋QCH和SHR+QCL三組MT/LD下降明顯(P均<0.05)，但三組之間差異無顯著性(P均>0.05)。 6.主動脈壁切片光鏡下Masson染色觀察Masson染色顯示，血管平滑肌細胞染色呈紅色，間質(zhì)膠原呈藍綠色。正常對照組WKY大鼠管壁膠原組織分布

10、均勻，中膜彈力纖維板排列整齊。SHR組大鼠管壁膠原成分顯著增多，中膜彈力纖維板僵硬變直甚至斷裂，數(shù)量減少，平滑肌細胞肥大增生明顯。與SHR組相比，SHR+NJC組膠原成分未有明顯變化，而SHR+CAP組、SHR+QCH組和SHR+QCL組管壁膠原成分則明顯減少，中膜彈力纖維板排列較規(guī)整。 7.主動脈中膜膠原面積百分比(VFC)比較與26周齡正常血壓對照組WKY大鼠相比，26周齡SHR組大鼠主動脈中膜膠原面積百分比明顯增加(P<0

11、.01)。與SHR組相比，SHR+NJC組大鼠中膜膠原面積百分比無明顯變化(P>0.05)；而SHR+CAP組和SHR+QCH組大鼠主動脈中膜膠原面積百分比顯著減少(P均<0.01)，SHR+QCL組也有明顯減少(P<0.05)，并且上述三組與SHR+NJC組相比差異具有顯著性(P<0.05或P<0.01)。 8.主動脈壁中膜平滑肌細胞超微結(jié)構(gòu)改變對照組WKY大鼠管壁中膜平滑肌細胞呈梭形，細胞核形態(tài)規(guī)則，細胞內(nèi)可見大量密斑、密體結(jié)構(gòu)，線

12、粒體形態(tài)正常，數(shù)量較少，嵴排列緊密呈Z字型，胞漿內(nèi)可見少量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。SHR組大鼠管壁中膜平滑肌細胞明顯肥大，細胞核形態(tài)不規(guī)則，胞漿內(nèi)可見大量腫脹變形的線粒體，呈空泡樣，且分布廣泛，嵴排列紊亂或崩解，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，密斑、密體等結(jié)構(gòu)明顯減少。SHR+NJC組管壁中膜平滑肌細胞肥大增生，胞漿內(nèi)亦可見到大量呈空泡樣變的線粒體，密斑密體等結(jié)構(gòu)減少。SHR+CAP組、SHR+QCH組、SHR+QCL組大鼠管壁中膜平滑肌細胞形態(tài)大致正常接近WKY組，

13、與SHR組相比，胞漿內(nèi)腫脹變形的線粒體數(shù)量明顯減少，密斑、密體等結(jié)構(gòu)增多，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量亦有減少。 9.主動脈壁bFGF、OPN mRNA表達水平比較(1)bFGF mRNA表達比較：與26周齡的WKY組大鼠相比，同周齡的SHR組大鼠血管壁bFGF mRNA表達顯著升高(P<0.01)。與SHR組大鼠相比，SHR+NJC組bFGF mRNA表達差異無顯著性(P>0.05)。與SHR組相比，SHR+CAP組、SHR+QCH組、SHR+

14、QCL組bFGF mRNA表達顯著下降(P均<0.01)，并且與SHR+NJC組相比具有顯著性差異(P均<0.01)。 (2)OPN mRNA表達比較：與26周齡的WKY組大鼠相比，同周齡的SHR組大鼠血管壁OPN mRNA表達顯著升高(P<0.01)。與SHR組大鼠相比，SHR+NJC組OPN mRNA表達差異無顯著性(P>0.05)。與SHR組相比，SHR+CAP組、SHR+QCH組、SHR+QCL組OPN mRNA表達顯著

15、下降(P均<0.01)，并且與SHR+NJC組相比具有顯著性差異(P均<0.01)，其中QCH組下降幅度最大，與SHR+QCL組相比有顯著性差異(P<0.05)。 10.主動脈壁bFGF、OPN蛋白表達水平比較(1)bFGF蛋白表達比較：與26周齡的WKY組大鼠相比，同周齡的SHR組大鼠血管壁bFGF蛋白表達明顯升高(P<0.01)。與SHR組大鼠相比，SHR+NJC組表達有所下降(P>0.05)；SHR+CAP組、SHR+QC

16、H組、SHR+QCL組顯著下降(P均<0.01)，且下降幅度大于SHR+NJC組(P<0.05或P<0.01)。 (2)OPN蛋白表達比較：與26周齡的WKY組大鼠相比，同周齡的SHR組大鼠血管壁OPN蛋白表達水平明顯升高(P<0.01)。與SHR組相比，SHR+NJC組表達水平無顯著性差異(P>0.05)：而SHR+CAP組、SHR+QCH組、SHR+QCL組表達水平顯著下降(P均<0.01)。且上述三組與SHR十NJC組相比

17、均有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論1．芩丹膠囊對SHR大鼠具有顯著的降壓療效，其降壓機制與芩丹膠囊降低SHR大鼠血漿ET-1水平，升高CGRP水平，調(diào)節(jié)失衡的血管活性肽網(wǎng)絡，以及降低阻力血管局部AngⅡ水平有關(guān)。 2．芩丹膠囊對SHR大鼠主動脈血管重構(gòu)有明顯的逆轉(zhuǎn)作用，其具體表現(xiàn)為：改善SHR大鼠主動脈壁形態(tài)學指標，降低主動脈中膜膠原含量。其機制與芩丹膠囊降低局部AngⅡ水平，抑制主動脈壁bFGF與OPN mRN