趨化因子受體CCR4在膽囊癌中的表達(dá)及其功能研究.pdf

1、大多數(shù)膽囊癌患者確診時已屬于晚期，做為膽道系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，膽囊癌預(yù)后很差，原因是膽囊癌極易浸潤及轉(zhuǎn)移，因此研究膽囊癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制，對膽囊癌轉(zhuǎn)移的預(yù)防和治療具有重要意義。越來越多的證據(jù)表明，趨化因子及其受體與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移相關(guān)。有研究表明，血液系統(tǒng)惡性腫瘤及原發(fā)性胃癌的轉(zhuǎn)移中，趨化因子受體CCR4均扮演一定重要的角色。但是，CCR4在膽囊癌侵襲、轉(zhuǎn)移過程中所起的作用的機(jī)制，到目前為止，尚未見報道。本課題利用shRNA干擾技術(shù)沉默

2、CCR4基因，研究CCR4對膽囊癌細(xì)胞周期、增殖、侵襲和遷移運(yùn)動能力的影響，探討趨化因子受體CCR4在膽囊癌組織中表達(dá)及CCR4與膽囊癌臨床預(yù)后的關(guān)系，以尋求膽囊癌治療的新途徑。
　　 第一部分CCR4的表達(dá)與膽囊癌生物學(xué)特征之間的關(guān)系
　　 目的：研究人膽囊癌細(xì)胞在利用siRNA干擾沉默趨化因子CCR4基因后，增殖、周期、侵襲和遷移運(yùn)動能力的變化。
　　 方法：不同人膽囊癌細(xì)胞CCR4的表達(dá)水平用Western

3、 blot檢測，膽囊癌細(xì)胞GBC-SD用慢病毒感染，CCR4基因用siRNA-CCR4沉默，干擾效果用Western-blot鑒定。膽囊癌細(xì)胞GBC-SD分為三組：GBC-SD、GBC-SD/CCR4-RNAi及GBC-SD/control細(xì)胞，這三組細(xì)胞用CCR4的配體CCL17(趨化因子)作用。三組細(xì)胞的增殖能力用CCK-8法檢測；細(xì)胞周期用流式細(xì)胞儀檢測；細(xì)胞遷移和侵襲能力用Transwell小室運(yùn)動侵襲試驗(yàn)檢測；Western

4、blot方法檢測CCR4基因沉默對其相應(yīng)配體CCL17和CCL22蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：沉默CCR4基因，對膽囊癌細(xì)胞GBC-SD的細(xì)胞周期及增殖均無影響，但是能明顯抑制GBC-SD細(xì)胞的侵襲及運(yùn)動遷移的能力，CCR4基因的沉默，并不能影響腫瘤細(xì)胞CCL17和CCL22基因的表達(dá)。
　　 結(jié)論：膽囊癌細(xì)胞GBC-SD表達(dá)趨化因子受體CCR4，CCR4與膽囊癌細(xì)胞的生長和增殖無關(guān)，卻可以促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞GBC-SD的

5、侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　 第二部分 CCR4在膽囊癌組織中的表達(dá)及其臨床意義
　　 目的：研究在膽囊癌組織中CCR4的表達(dá)，以及CCR4與臨床病理因素間的相互關(guān)系、及其對膽囊癌預(yù)后的影響。
　　 方法：CCR4在膽囊癌組織標(biāo)本及慢性膽囊炎膽囊粘膜組織標(biāo)本中的表達(dá)情況用免疫組織化學(xué)法檢測，分析時結(jié)合臨床資料進(jìn)行，應(yīng)用Kaplan-Meier法進(jìn)行CCR4表達(dá)陽性組與陰性組生存分析，組間分析應(yīng)用log-rank檢驗(yàn)，采用C

6、ox回歸多因素模型進(jìn)行多因素分析，CCR4在膽囊癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性采用x2檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：膽囊癌細(xì)胞胞漿和/或胞膜有CCR4表達(dá)，呈棕黃色，在膽囊癌中，CCR4蛋白的表達(dá)明顯高于慢性膽囊炎膽囊上皮組織(P<0.001)。CCR4的高表達(dá)與膽囊癌病人的性別、年齡、病理分級、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及神經(jīng)淋巴管侵犯等因素?zé)o關(guān)，而與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.015)及組織學(xué)分級有關(guān)(P=0.042)。CCR4陽性組與陰性組術(shù)后生存