趨化因子受體CCR4在乳腺癌中的表達及其作用.pdf

1、研究背景和目的：越來越多的證據(jù)表明,趨化因子及其受體與腫瘤的生長和轉移相關。趨化因子受體CCR4在維持免疫平衡過程中發(fā)揮重要作用。最近的研究顯示,CCR4在血液系統(tǒng)惡性腫瘤以及原發(fā)胃癌中都扮演一定的角色。但是,CCR4在乳腺癌中的作用還不清楚。本研究的目的是闡明趨化因子受體CCR4在乳腺中的表達情況,并且探索其在乳腺癌中的作用。
　　方法：應用RT-PCR、westernblot和流式細胞分析等方法檢測不同人類乳腺癌細胞CCR4的

2、表達水平。采用慢病毒包裝的方法獲得CCR4過表達慢病毒以及CCR4干擾慢病毒。分別感染CCR4表達水平較低的MDA-MB-231細胞系和CCR4表達水平較高的MDA-MB-231肺高轉移潛能細胞株(MDA-MB-231HM),從而獲得CCR4過表達的MDA-MB-231/CCR4細胞株以及CCR4下調(diào)的231HM/CCR4-RNAi細胞株。在體外實驗中,采用流式細胞檢測、CCK-8及細胞遷移實驗等方法來觀察CCR4基因修飾對乳腺癌細胞周

3、期分布、增殖能力及對CCL17趨化反應能力的影響。在體內(nèi)實驗中,我們首先建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,觀察比較CCR4基因修飾對移植瘤生長曲線以及肺轉移的影響；用免疫組化的方法標記移植瘤內(nèi)新生血管(CD34),計數(shù)MVD,比較CCR4基因修飾對移植瘤血管形成的影響；采用ELISA方法,比較移植瘤內(nèi)CCL17和CCL22水平的變化。在人乳腺癌組織的研究中,隨機選擇復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院2003年2月～2006年1月間的483例浸潤性乳腺癌

4、患者的組織標本,應用免疫組化的方法,分析CCR4的表達情況。采用Kaplan-Meier生存分析以及Cox比例風險回歸分析CCR4的表達與患者無病生存率及總生存率的關系。
　　結果：CCR4在不同的人類乳腺癌細胞中有不同水平的表達。并且,在肺高轉移潛能的MDA-MB-231HM細胞株和骨轉移細胞株MDA-MB-231-B中,CCR4表達水平高于野生型MDA-MB-231。體外實驗結果顯示：CCR4基因過表達或下調(diào)后,細胞的周期分布

5、、增殖能力沒有改變。而乳腺癌細胞對CCL17的趨化反應是隨著CCR4基因的上調(diào)而增加,隨著CCR4基因下調(diào)而降低；而體內(nèi)實驗結果顯示：1.CCR4過表達促進乳腺癌移植瘤生長而CCR4下調(diào)可以抑制乳腺癌移植瘤生長；2.CCR4過表達細胞所成移植瘤微血管密度增加而CCR4下調(diào)所成移植瘤微血管密度降低；3.移植瘤中的CCL22和CCL17水平與CCR4的表達水平正相關；4.CCR4過表達促進乳腺癌肺轉移而CCR4下調(diào)抑制乳腺癌肺轉移的形成。人

6、乳腺癌組織中的研究結果顯示,在483例乳腺癌患者中,有100例患者為CCR4陽性,陽性率為20.7％；CCR4的表達與HER2陽性、腫瘤局部復發(fā)、淋巴結轉移、肺轉移及骨轉移相關聯(lián)。CCR4陽性患者的總生存率和無病生存率較低；多因素分析結果顯示,CCR4是浸潤性乳腺癌患者總生存率的獨立預后因素。
　　結論：CCR4在人類乳腺癌細胞系中存在差異性表達；CCR4的表達可以促進乳腺癌腫瘤的生長和肺轉移；CCR4狀態(tài)是乳腺癌患者一個潛在的預