CC型趨化因子CCL20及其受體CCR6在早期硬皮病皮損中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：探究CC型趨化因子CCL20及其受體CCR6在早期硬皮病患者皮損中的表達(dá)，研究CCL20/CCR6是否參與硬皮病的發(fā)生和發(fā)展。
　　 方法：
　　 一．免疫組織化學(xué)及熒光定量PCR分別檢測早期硬皮病患者皮損中CC型趨化因子CCL20及其受體CCR6蛋白及mRNA的表達(dá)。
　　 二．采用組織塊培養(yǎng)法分別分離硬皮病患者及正常人真皮成纖維細(xì)胞，以含10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行體外原代培養(yǎng)。通過形態(tài)學(xué)及免疫細(xì)胞

2、化學(xué)的方法對其進(jìn)行鑒定，MTT法測細(xì)胞的增殖。分別用不同濃度的Th1及Th2細(xì)胞因子進(jìn)行處理，在不同的時間點分別取上清行ELISA，細(xì)胞mRNA作實時定量PCR檢測。
　　 三．檢測成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的CCL20的趨化活性，并比較硬皮病成纖維細(xì)胞和正常成纖維細(xì)胞所產(chǎn)生的CCL20的趨化活性是否有差異。
　　 結(jié)果：
　　 一．CCL20及其受體CCR6蛋白及mRNA在早期硬皮病皮損中的表達(dá)增加，而且二者在皮損中的分布

3、部位一致。
　　 二．體外原代培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞可快速穩(wěn)定增殖。硬皮病患者真皮成纖維細(xì)胞和正常人真皮成纖維細(xì)胞在形態(tài)學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)上無明顯差異?；A(chǔ)狀態(tài)下，CCL20 mRNA及蛋白質(zhì)在兩種細(xì)胞中均很低，但在硬皮病患者真皮成纖維細(xì)胞表達(dá)水平較正常人真皮成纖維細(xì)胞高；Th1型細(xì)胞因子(TNF-αand IL-1β)能夠隨劑量和時間的增加顯著提高成纖維細(xì)胞CCL20的表達(dá)水平；相反，硬皮病患者真皮成纖維細(xì)胞CCL20的表達(dá)水平則

4、隨Th2型細(xì)胞因子(IL-4)濃度和時間的增加而降低。
　　 三．重組型及成纖維細(xì)胞上清中的CCL20對PBMCs的趨化功能呈濃度依賴性。兩種成纖維細(xì)胞上清的CCL20較重組型CCL20對PBMCs具有更強的趨化活性；硬皮病患者真皮成纖維細(xì)胞上清中的CCL20的趨化活性較正常皮膚成纖維細(xì)胞高；CCL20抗體能完全阻斷重組型CCL20的趨化活性，但對硬皮病患者成纖維細(xì)胞上清PBMCs的趨化活性僅能阻斷43.98±10.48％。