微囊化兔坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植對大鼠脊髓損傷后NF-κB及IκBα表達(dá)變化的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過觀察和分析微囊化兔坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植對大鼠急性脊髓損傷后NF-κB因子及IκBα表達(dá)變化的影響，探討微囊化兔坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植治療促進(jìn)大鼠急性脊髓損傷功能恢復(fù)的作用和分子機(jī)理，為微囊化兔坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植治療脊髓損傷提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：取Sprague Dawley（SD）大白鼠120只，體重220～250g，雌雄不拘；健康成年家兔10只，體重2000～2500g，雌雄不拘。隨機(jī)分為4組：A組（微囊

2、化坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植組，n=36）；B組（組織細(xì)胞懸液移植組，n=36）；C組（單純損傷組，n=36）；D組（假手術(shù)組，n=12）。對各組大鼠行右后肢運(yùn)動(dòng)功能BBB評分。無菌條件下取成年家兔預(yù)變性處理的雙側(cè)坐骨神經(jīng)干制成組織細(xì)胞懸液，低速離心后與1.5％海藻酸鈉溶液混合并噴入20mmol/L的氯化鋇溶液中制成微囊化坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞懸液。A、B、C組建立大鼠T10脊髓右半橫斷損傷模型，并分別在損傷處移入吸附10μl的微囊化組織細(xì)胞懸液的

3、明膠海綿、組織細(xì)胞懸液的明膠海綿及明膠海綿，D組只去除椎骨，不損傷脊髓也不移植。術(shù)后6h、12h、24h、3d、7d、14d，每個(gè)時(shí)相點(diǎn)取6只SD大鼠行右后肢運(yùn)動(dòng)功能BBB評分后麻醉用4％多聚甲醛經(jīng)左心灌注，截取移植部位或損傷節(jié)段約1cm長脊髓組織。石蠟切片后行尼氏體染色（Niss1染色）、NF-κB和IκBα的過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素（Streptavidin/Peroxidase，SP）染色。 結(jié)果：術(shù)后隨時(shí)間延長各組動(dòng)物

4、后肢運(yùn)動(dòng)功能均有不同程度的恢復(fù)，但都未達(dá)到正常水平：3天內(nèi)各組間BBB評分無顯著性差異；而7天后A組和B組大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)較好，BBB評分較高，與其它組比較均有顯著性差異（P<0.05），且A組比B組恢復(fù)更好（P<0.05）。SCI后神經(jīng)元數(shù)量減少，尼氏體脫失、溶解：術(shù)后第7天及第14天微囊組Niss1染色神經(jīng)元數(shù)量顯著增多（P<0.05）。NF-κB陽性細(xì)胞主要見于神經(jīng)元細(xì)胞漿及細(xì)胞核內(nèi)等。大鼠脊髓損傷后上述細(xì)胞NF-κB表達(dá)增加，2

5、4h達(dá)高峰水平，3d后開始逐漸降低，7d基本降至正常。微囊組與單損組、細(xì)胞組比較差異顯著（P<0.05）。而IκBα陽性細(xì)胞主要見于神經(jīng)元細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞的胞漿內(nèi)。大鼠脊髓損傷后上述細(xì)胞IκBα表達(dá)降低，24h降到最低點(diǎn)，3d后表達(dá)開始回升，7d逐步恢夏正常水平。微囊組與單損組、細(xì)胞組比較差異顯著（P<0.05）。 結(jié)論：微囊化兔坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植對脊髓損傷后NF-κB的活性表達(dá)起抑制作用還可以抑制IκBα磷酸化降解環(huán)節(jié)，對于減