微囊化同種異體坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植對(duì)脊髓損傷大鼠膠質(zhì)細(xì)胞MHCⅡ表達(dá)的影響.pdf

1、目的：脊髓損傷(spinal cord iniury，SCI)后于損傷處移植周圍神經(jīng)或雪旺細(xì)胞(Schwann cells，SCs)能夠促進(jìn)神經(jīng)元的存活、軸突的再生及功能恢復(fù)。微囊技術(shù)是近幾十年發(fā)展起來(lái)的一種免疫隔離技術(shù)，可以有效隔離大分子免疫活性物質(zhì)，使囊內(nèi)細(xì)胞免受宿主免疫系統(tǒng)攻擊，然而對(duì)微囊是否可以阻止或影響抗原遞呈卻鮮有研究。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)觀察微囊包被的同種異體神經(jīng)組織細(xì)胞移植到受損脊髓后的主要組織相容性抗原(Major Histo

2、compability antigen，MHC)Ⅱ類分子即MHC Ⅱ的表達(dá)情況，探討微囊對(duì)移植排斥的作用以及受損脊髓修復(fù)的可能機(jī)制。 方法：取健康成年Wistar大鼠32只，體重200～250g；健康成年sprague-Dawley(sD)大鼠96只，體重200～250g，雌雄不限，隨機(jī)分為4組：A組(微囊化坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植組，n=24)；aM(組織細(xì)胞懸液移植組，n=24)；C組(空囊組，n=24)；D組(單純損傷組，n=

3、24)。分好組后對(duì)各組大鼠行右后肢運(yùn)動(dòng)功能改良Tarlov評(píng)分[42]。無(wú)菌條件下取成年Wistar大鼠預(yù)變性處理的雙側(cè)坐骨神經(jīng)干制成組織細(xì)胞懸液，低速離心后與1.5％海藻酸鈉溶液混合并噴入20mmol/L的氯化鋇溶液中制成微囊化坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞懸液。A、B、C、D組建立大鼠T8脊髓右半橫斷損傷模型，并分別在損傷處移入吸附10μl的微囊化組織細(xì)胞懸液的明膠海綿、組織細(xì)胞懸液的明膠海綿及空微囊的明膠海綿，D組只填充明膠海綿。術(shù)后10、21

4、、35、60天，各組每時(shí)相取6只大鼠行右后肢運(yùn)動(dòng)功能改良Tarlov評(píng)分后被麻醉用4％多聚甲醛經(jīng)心灌注，截取移植部位或損傷節(jié)段約1cm長(zhǎng)脊髓組織及相應(yīng)脊神經(jīng)節(jié)。石蠟切片后行HE及MHC II免疫組化染色。 結(jié)果：B組(組織細(xì)胞懸液移植組)術(shù)后10d、21d時(shí)，脊髓MHC Ⅱ陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量較其余3組明顯增多，21d時(shí)更為顯著(P<0.05)，35d時(shí)MHC II表達(dá)下降，與21d相比有差異(P<0.05)。21d和35d時(shí)部分移植

5、區(qū)出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，60d時(shí)移植區(qū)未見(jiàn)神經(jīng)元數(shù)量明顯增多，仍多見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生。A組(微囊化坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植組)組在10d、21d時(shí)，移植區(qū)MHC Ⅱ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較B組明顯減少(P<0.05)，35d時(shí)微囊組炎性反應(yīng)減輕，出現(xiàn)大量具有神經(jīng)元特征的細(xì)胞；60d時(shí)MHC Ⅱ陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量較35d有所增加(P>0.05)，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞，神經(jīng)元形態(tài)正常，數(shù)量較多。C(空囊對(duì)照組)、D組(單純損傷組)在10 d、21 d

6、時(shí)，見(jiàn)少量MHC Ⅱ陽(yáng)性細(xì)胞，35d時(shí)明顯減少(P<0.05)，60天消失。C、D兩組各時(shí)相無(wú)明顯差異(P>0.05)。4組大鼠脊神經(jīng)節(jié)各時(shí)相均未見(jiàn)MHC Ⅱ分子表達(dá)。右后肢運(yùn)動(dòng)功能改良Tarlov評(píng)分各組術(shù)前正常，SCI后第10天均在1分左右，各組間統(tǒng)計(jì)無(wú)明顯差異；之后評(píng)分逐漸升高，21天時(shí)A組與B、C、D組比較有差異(P<0.05)；35、60天時(shí)A組升高程度較B、C、D組要大，差異有顯著性(P<0.01)，但未達(dá)到正常水平。大鼠右

7、后肢運(yùn)動(dòng)功能有不同程度的恢復(fù)，以微囊組恢復(fù)最好。 結(jié)論：同種異體坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植脊髓移植區(qū)高表達(dá)MHC Ⅱ抗原，提示同種異體坐骨神經(jīng)組織細(xì)胞移植存在免疫排斥反應(yīng)；海藻酸鈉—氯化鋇微囊處理后在一定程度上可以減少脊髓膠質(zhì)細(xì)胞MHC Ⅱ抗原分子的表達(dá)，減弱對(duì)同種異體抗原的抗原遞呈作用和免疫排斥反應(yīng)；脊髓膠質(zhì)細(xì)胞MHC Ⅱ的表達(dá)的變化與移植部位的炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度相一致，提示脊髓膠質(zhì)細(xì)胞MHC Ⅱ的表達(dá)的變化與移植部位的免疫排斥反應(yīng)程度