不同結合狀態(tài)硫酸軟骨素B對三維培養(yǎng)的雞胚背根節(jié)神經(jīng)元突起生長影響的機理研究.pdf

1、目的: 體外模擬神經(jīng)元在基質(zhì)中生長的情況，構建雞胚背根節(jié)細胞3D生長模型，觀察游離的和與SeaPrep~瓊脂糖凝膠共價結合的硫酸軟骨素B(CS-B)在不同濃度的瓊脂糖凝膠中對雞胚背根節(jié)神經(jīng)突起生長的影響。利用原子力顯微鏡觀察和比較不同濃度的瓊脂糖凝膠及與CS-B共價結合的凝膠在孔面積、分子輪廓等方面的差異。通過上述觀察探討CS-B多糖長鏈對在三維空間中生長的雞胚背根節(jié)神經(jīng)突起生長的影響及其作用機制。 方法: 1．

2、配制無菌的0.5％、0.75％、1％、1.25％、1.5％SeaPrepR瓊脂糖凝膠溶液，構建三維培養(yǎng)系統(tǒng)。 2．采用CDI(1’1’-羰基二咪唑)介導共價技術對瓊脂糖水凝膠進行CS-B共價修飾，形成新的枝接聚合物。 3．將E9-10天的雞胚背根節(jié)剪碎后接種于瓊脂糖水凝膠中，在24h、48h、72h和96h觀察神經(jīng)細胞團生長情況，并測量在普通SeaPrepR瓊脂糖水凝膠、添加游離的CS-B及共價結合CS-B的瓊脂糖水凝膠

3、中生長的神經(jīng)突起長度。 4．利用原子力顯微鏡觀測SeaPrep~瓊脂糖水凝膠的孔面積，并比較在共價結合了CS-B后瓊脂糖水凝膠孔面積及分子結構等物理特性的變化。 結果: 1．雞胚背根節(jié)神經(jīng)突起在1％的瓊脂糖水凝膠中開始呈3D生長，在小于1％的瓊脂糖水凝膠中只能呈2D生長。 2．隨著瓊脂糖水凝膠濃度增加，神經(jīng)突起的長度逐漸縮短。在1％和1.25％的瓊脂糖水凝膠中，游離和共價結合的CS． B對3D生長

4、的神經(jīng)突起有明顯的抑制作用(P<0.05)，但對2D生長的神經(jīng)突起并沒有明顯的抑制效應。 3．在高濃度(1.5％)的瓊脂糖水凝膠當中，僅觀察到共價結合的CS-B可以抑制神經(jīng)突起的生長(P<0.05)。 4．CS-B在部分3D培養(yǎng)中有讓神經(jīng)突起成束生長的傾向。 5．原子力顯微鏡顯示：隨著瓊脂糖水凝膠濃度增加，其孔面積逐漸減?。何覀兪状伟l(fā)現(xiàn)了共價結合的CS-B可以明顯改變凝膠分子形態(tài)和空間聚合狀態(tài)；在1％、1.25％

5、、1.5％的濃度下，共價結合的CS-B可以縮小瓊脂糖水凝膠的孔面積(P<0.05)；但在0.75％和1.75％兩個濃度下瓊脂糖水凝膠孔面積沒有受到CS-B的影響(P>0.05)；隨著濃度增大，普通瓊脂糖水凝膠和共價結合CS-B的瓊脂糖水凝膠的孔面積均呈指數(shù)下降，指數(shù)曲線擬合方程分別為y=7.209e-0.91x，y=7.1203e-0.91x。 結論: 1．雞胚背根節(jié)神經(jīng)團在培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)與瓊脂糖水凝膠濃度密切相關。