人工合成硫酸軟骨素結(jié)合肽促小鼠小腦顆粒細(xì)胞神經(jīng)突生長實驗研究.pdf

1、硫酸軟骨素蛋白聚糖（CSPGs）在脊髓損傷后形成的膠質(zhì)瘢痕的微環(huán)境中含量升高，它是一類重要的軸突再生抑制因子。近些年的研究表明，CSPGs對神經(jīng)損傷修復(fù)的抑制作用是通過硫酸軟骨素（CS）實現(xiàn)的。所以我們通過噬菌體展示技術(shù)篩選出了幾種硫酸軟骨素結(jié)合肽，并且通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）鑒定了其中一種與CS表現(xiàn)出最強(qiáng)的親和力的結(jié)合肽TR。
　　在本課題中，我們主要通過軸突生長實驗、CSPGs斑塊實驗和免疫印跡實驗（Western

2、Blot）研究了結(jié)合肽TR（實驗組）和隨機(jī)肽TS（對照組）在原代小鼠小腦顆粒細(xì)胞中對CSPGs的功能的作用及相關(guān)的信號通路的改變；另外用人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SK-N-SH）做了劃痕實驗，研究CSPGs和CS結(jié)合肽TR對神經(jīng)細(xì)胞遷移的影響。實驗結(jié)果顯示CS結(jié)合肽TR表現(xiàn)出對CSPGs在軸突再生中抑制功能有拮抗拮抗作用。其中在軸突生長實驗中，CSPGs濃度在0.5-5μg/mL范圍內(nèi)隨著濃度的升高對軸突的生長有顯著的抑制作用（CSPGs濃度

3、為1.0和2.5μg/mL時，P＜0.01）。CSPGs濃度為1μg/mL時，結(jié)合肽TR給藥濃度50-200μg/mL時均能顯著促進(jìn)軸突的生長（TR濃度為100和200μg/mL時，P＜0.01）。在CSPGs斑塊實驗中，與對照組相比，50μg/mL結(jié)合肽TR給藥時，小腦顆粒細(xì)胞軸突可以穿過CSPGs（5μg/mL）形成的斑塊邊界。在免疫印跡實驗中，我們發(fā)現(xiàn)CSPGs（1μg/mL）降低了L1、pERK/ERK、mTOR的表達(dá)水平，而共

4、同給予TR結(jié)果顯示可不同程度提高L1、pERK/ERK和mTOR的表達(dá)水平。劃痕實驗觀察到：與對照組相比，CSPGs濃度為2μg/mL時能抑制SK-N-SH細(xì)胞的遷移；與CSPGs組相比，CS結(jié)合肽TR（100μg/mL）共同處理時能夠促進(jìn)細(xì)胞的遷移。上述研究結(jié)果表明在含有CSPGs的抑制環(huán)境中CS結(jié)合肽TR可通過增加L1表達(dá)，并通過調(diào)控Erk、mTOR信號通路來促進(jìn)軸突的生長，且能改善神經(jīng)細(xì)胞的生長狀態(tài)，說明結(jié)合肽 TR其有應(yīng)用于神經(jīng)