miR-128在小兒急性淋巴細(xì)胞白血病中表達(dá)分析與功能研究.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼小分子RNA，其長(zhǎng)度為19到25個(gè)核苷酸。在真核生物中，miRNA對(duì)發(fā)育以及多種生理過(guò)程起著重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)，大量的研究報(bào)道表明miRNA與多種癌癥的發(fā)生、預(yù)后、轉(zhuǎn)移等相關(guān)，其中，miRNA在白血病發(fā)生及其治療過(guò)程中的重要作用逐漸被發(fā)掘和報(bào)道。目前，miRNA與白血病的緊密相關(guān)性已被證實(shí)，但是，關(guān)于miRNA在小兒白血病中的表達(dá)、調(diào)控機(jī)制及臨床意義遠(yuǎn)未被闡明。
　　 前期m

2、iRNA芯片結(jié)果表明miR-128在小兒急性淋巴細(xì)胞白血病(actuelymphoblastic leukemia，ALL)中特異性高表達(dá)。為了進(jìn)一步了解miR-128在小兒ALL中的作用，我們利用q-RT PCR方法檢測(cè)miR-128在60份樣品(包括28例初發(fā)、19例緩解、9例復(fù)發(fā)以及4例正常樣本)中的表達(dá)量。結(jié)果表明：初發(fā)以及復(fù)發(fā)樣品中miR-128表達(dá)量升高(相比于正常樣品)。根據(jù)miR-128的表達(dá)量，結(jié)合臨床資料(包括細(xì)胞分

3、型、危險(xiǎn)程度、疾病發(fā)生階段等)做進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)miR-128的表達(dá)與預(yù)后相關(guān)。其中與緩解相關(guān)的分析結(jié)果最為顯著，初發(fā)組和復(fù)發(fā)組中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于緩解組60倍以上，而初發(fā)組與復(fù)發(fā)組表達(dá)水平相當(dāng)。此外，在復(fù)發(fā)組病人中，病例初發(fā)時(shí)的miR-128表達(dá)量比非復(fù)發(fā)組初發(fā)時(shí)的表達(dá)量高出8倍以上。miR-128在T-ALL中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于B-ALL，超出10倍以上。臨床生存統(tǒng)計(jì)還表明，高表達(dá)量的miR-128(＞100 fold)無(wú)病生存周期明顯縮短

4、。這說(shuō)明miR-128對(duì)臨床預(yù)后具有重大意義，是臨床診斷的潛在分子標(biāo)記。
　　 鑒于miR-128在小兒ALL表達(dá)譜的重要現(xiàn)象，我們對(duì)它在小兒ALL中的功能也做了進(jìn)一步探索。首先，利用生物信息學(xué)軟件分析，我們預(yù)測(cè)到干擾素調(diào)節(jié)因子-4(IRF4：Interferon regulatory factor4)是miR-128的重要靶基因，該基因是一種干擾素調(diào)節(jié)因子，參與B細(xì)胞和T細(xì)胞的成熟過(guò)程。這一預(yù)測(cè)也進(jìn)一步得到實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。雙熒光素酶

5、報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果顯示，miR-128-PCD6.2表達(dá)載體和IRF4-psi-check2載體共轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞后，熒光素酶的活性明顯下降，熒光值下降約60％。Western blot結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)入miR-128 inhibitor后，IFR4蛋白明顯降低。這些結(jié)果表明，IRF4是miR-128的下游靶基因。因此，我們推測(cè)，miR-128可能是通過(guò)調(diào)節(jié)IRF4而發(fā)揮其在小兒ALL中的作用。進(jìn)一步開展miR-128作用機(jī)制的研