輔酶A質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、輔酶A是生物體內(nèi)?；D(zhuǎn)移酶的輔酶，臨床上用于治療白細(xì)胞減少癥、原發(fā)性血小板減少性紫癜及功能性低熱等。輔酶A現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)二部第六冊(cè)生化藥品標(biāo)準(zhǔn)第一分冊(cè)，國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)均未收載。本文根據(jù)新藥注冊(cè)的要求，參考現(xiàn)行輔酶A質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及輔酶A分子結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝的特點(diǎn)，建立了輔酶A有關(guān)物質(zhì)、溶劑殘留、金屬離子和含量的測(cè)定方法。
　　 1、有關(guān)物質(zhì)：采用梯度洗脫高效液相色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)。色譜柱為C18柱（250×4.6m，5μ

2、m）；流動(dòng)相A：磷酸鹽緩沖溶液（pH6.5）-甲醇（90：10），流動(dòng)相B：甲醇：0.02％庚烷磺酸鈉溶液（50：50），梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm。方法檢測(cè)限為16ng，樣品有關(guān)物質(zhì)含量為10.8％～45.1％。
　　 2、殘留溶劑：采用氣相色譜法測(cè)定輔酶A中殘留溶劑丙酮、巰基乙醇的含量。色譜柱為HP-INNOWAX毛細(xì)管柱（30m×0.53mm，1μ m），氫火焰離子化檢測(cè)器，載氣為高純N2，頂空進(jìn)樣。丙酮、巰基乙醇的濃

3、度在10～240μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r>0.999），方法RSD分別為0.73％、0.57％（n=6），檢測(cè)限分別為1.1ng、3.7ng。樣品丙酮含量為0.06～4.22％，巰基乙醇含量為0.12～0.38％。
　　 3、金屬離子：樣品經(jīng)密閉微波消解后，采用ICP-AES法測(cè)定輔酶A中鋰、鈉、鈣3種金屬元素的含量。儀器參數(shù)為：射頻功率：1250W，載氣流速：1.0L/min，輔氣流速：15L/min，樣品

4、提升速率：1.85ml/min。在0～16μg/ml濃度范圍內(nèi)，各元素的分析信號(hào)強(qiáng)度值與濃度均呈良好的線性關(guān)系（r>0.999），鋰、鈉、鈣元素的檢測(cè)限分別為1.29μg/ml、3.42μg/ml、30.72μg/ml，測(cè)定方法RSD分別為1.7％、3.4％、1.8％（n=6），各元素的平均加樣回收率為96.3％～106.5％。樣品中鋰含量為10.8～22.2mg/g，鈉含量為0～2.1mg/g，鈣含量為2.3～4.7mg/g。

5、　　 4、含量測(cè)定：采用高效液相色譜法測(cè)定輔酶A的含量。色譜柱為C18柱（250×4.6mm，5μ m），流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖溶液（pH6.5）-甲醇（90：10），檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm。輔酶A濃度在30～270μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.99995），方法RSD為0.5％（n=6），定量限為98ng，樣品含量為48.08％～84.44％。本文采用除雜質(zhì)法確定輔酶A標(biāo)準(zhǔn)品的含量，并驗(yàn)證了高效液相色譜法測(cè)定含量與酶法