甲亢合并妊娠對仔鼠腎臟Desmin蛋白及轉(zhuǎn)化生長因子-β1表達的影響.pdf

1、甲狀腺功能亢進癥（簡稱甲亢）的發(fā)病率之高越來越受到人們的重視，尤其是年輕女性。研究證明妊娠期甲亢的患病率為0.02％-0.2％，整個孕期母親T4都能通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，若母親甲亢未治療或未治愈，其過量的甲狀腺激素會通過胎盤，引起早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎并使產(chǎn)科各種并發(fā)癥如胎兒窘迫、胎兒宮內(nèi)生長遲緩、妊高癥和妊娠期糖尿病等危險性明顯增加。目前國內(nèi)外有關(guān)妊娠期甲亢對子代影響的研究報道較少。
　　 目的:轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transfor

2、ming growth factor，TGF-β1)具備促進細胞增殖以及抑制細胞增殖的雙重功能。激活TGF-β/smad信號轉(zhuǎn)導通路，可導致腎臟細胞的壞死、凋亡及腎臟間質(zhì)的成纖維細胞增生，腎間質(zhì)臟纖維化。Desmin蛋白是肌源性細胞損傷的重要標志。當足細胞因各種原因發(fā)生損傷時，可大量表達Desmin蛋白而發(fā)生表型轉(zhuǎn)化。觀察不同程度甲亢合并妊娠對不同生長期仔鼠腎臟TGF-β1和足細胞骨架蛋白Desmin蛋白表達的影響，探討母親甲亢合并妊娠

3、對仔鼠腎臟的損傷，為甲亢合并妊娠時對仔鼠腎臟的變化及其病變的預(yù)防及治療提供依據(jù)。
　　 實驗方法:
　　 1.建立甲亢模型60日齡左右的健康SD大鼠54只，其中雌鼠36只，雄鼠18只，體重180～200g。所有實驗動物適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，若動物飲食、飲水及活動正常，無不良反應(yīng)即可以開始實驗。將雌鼠隨機分為正常對照組(N組)12只，輕度甲亢組（A組）12只，重度甲亢組(B組)12只。連續(xù)經(jīng)口灌胃給藥，每天一次。A組、B組給左甲

4、狀腺素鈉量分別為每天50ug/100g、150ug/100g。N組，灌服等量的生理鹽水。每天記錄飲食、飲水量，行為特征;每隔三天稱量體重，調(diào)整給藥量。灌胃21天時，在不使用麻醉劑條件下進行尾靜脈采血2-3ml，采用化學發(fā)光法檢測游離三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine，F(xiàn)T3)、游離甲狀腺素（free thyroxine，F(xiàn)T4），促甲狀腺激素(thyroid-stimulating hormone，TSH)。

5、r>　　 2.合籠將各組準孕雌鼠與正常雄鼠按2∶1于當日下午17時合籠，次日早晨陰道口發(fā)現(xiàn)白色米粒大小的陰栓為受孕，確定為妊娠0天，繼續(xù)灌胃直至分娩。
　　 3.取材待大鼠分娩后，正常對照組、輕度甲亢組、重度甲亢組分別標記為N組、A組及B組。各組分別于0天，21天，60天選取10只雄性仔鼠宰殺，并分別標記為正常對照組(N0，N21，N60)，輕度甲亢組(A0，A21，A60)和重度甲亢組(B0，B21，B60)。通過心臟采血采

6、取21天和60天仔鼠血液，靜置15分鐘后離心取血清，應(yīng)用化學發(fā)光法檢測FT3、FT4及TSH。應(yīng)用脲酶波氏比色法測定尿素氮(BUN)及苦昧酸法測定肌酐(Cr)。取左側(cè)腎組織應(yīng)用western blot法測定腎組織中Desmin蛋白及TGF-β1的表達并行HE染色，并于21天時取左側(cè)腎組織行透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果:
　　 1.母鼠甲狀腺功能輕度甲亢組與重度甲亢組FT3、FT4均較正常對照組顯著升高，且重度甲亢組

7、FT3、FT4較輕度甲亢組顯著升高;輕度甲亢組與重度甲亢組TSH均較正常對照組顯著降低，且重度甲亢組TSH較輕度甲亢組降低。
　　 2.仔鼠一般性狀正常對照組仔鼠生長發(fā)育良好，逐漸長出絨毛，絨毛色澤好，輕度甲亢組和重度甲亢組仔鼠生后較正常對照組體重減少，絨毛生長緩慢，無光澤，重度甲亢組仔鼠此種表現(xiàn)更為明顯。
　　 3.仔鼠腎功能
　　 21天時輕度甲亢組和重度甲亢組BUN及Cr較正常對照組顯著增高。21天時重度甲

8、亢組BUN及Cr較輕度甲亢組顯著增高。60天時輕度甲亢組和重度甲亢組BUN及Cr較正常對照組顯著增高。60天時重度甲亢組BUN及Cr較輕度甲亢組顯著升高。
　　 正常對照組21天與同組60天比較，BUN及Cr沒有明顯的差別。輕度甲亢組60天與同組21天比較，BUN及Cr有明顯的升高;重度甲亢組60天與同組21天比較，BUN及Cr有明顯升高。
　　 4.仔鼠甲狀腺功能21天時輕度甲亢組和重度甲亢組FT3、FT4較正常對照組

9、增高TSH較正常對照組減低。21天時重度甲亢組FT3、FT4較輕度甲亢組增高，TSH較輕度甲亢組減低。60天時輕度甲亢組FT3、FT4較正常對照組增高，TSH較正常對照組減低，但無統(tǒng)計學意義。60天時重度甲亢組FT3、FT4較正常對照組增高，TSH較正常對照組減低。60天時重度甲亢組FT3、FT4較輕度甲亢組增高，TSH較輕度甲亢組減低。
　　 正常對照組60天FT3、FT4與21天時無統(tǒng)計學差別。輕度甲亢組60天FT3、FT4

10、較21天時降低，有統(tǒng)計學意義，TSH較21天時升高，有統(tǒng)計學意義。重度甲亢組60天FT3、FT4較21天時減低，無統(tǒng)計學意義，TSH較21天時升高，無統(tǒng)計學意義。
　　 5.Desmin蛋白及TGF-β1的表達0天時輕度甲亢組和重度甲亢組Desmin蛋白表達較正常對照組顯著增高，重度甲亢組較輕度甲亢組Desmin蛋白表達顯著增高。21天時輕度甲亢組和重度甲亢組Desmin蛋白較正常對照組顯著增高，且重度甲亢組Desmin蛋白表達

11、較輕度甲亢組顯著增高。60天時，輕度甲亢組和重度甲亢組Desmin蛋白較正常對照組顯著增高，60天時重度甲亢組Desmin蛋白較輕度甲亢組顯著增高。
　　 正常對照組仔鼠0天、21天和60天時，Desmin蛋白表達無明顯的差別。輕度甲亢組21天及60天Desmin蛋白表達較0天均明顯增加，60天較21天表達明顯增加。重度度甲亢組21天及60天Desmin蛋白表達較0天均明顯增加，60天較21天表達明顯增加。
　　 0天時

12、輕度甲亢組和重度甲亢組TGF-β1表達較正常對照組顯著增高，重度甲亢組較輕度甲亢組TGF-β1表達顯著增高。21天時輕度甲亢組和重度甲亢組TGF-β1較正常對照組顯著增高，21天時重度甲亢組TGF-β1表達較輕度甲亢組顯著增高。60天時，輕度甲亢組和重度甲亢組TGF-β1較正常對照組顯著增高，60天時重度甲亢組TGF-β1較輕度甲亢組顯著增高。
　　 正常對照組仔鼠0天、21天和60天時，TGF-β1表達無明顯的差別。輕度甲亢組

13、21天及60天TGF-β1表達較0天均明顯增加，60天較21天表達明顯增加。重度度甲亢組21天及60天TGF-β1表達較0天均明顯增加，60天較21天表達明顯增加。
　　 6.HE染色結(jié)果正常組仔鼠0天腎組織尚未發(fā)育完全，腎系膜細胞及內(nèi)皮細胞較少，腎小球體積較小。21天及60天腎組織結(jié)構(gòu)整齊，腎小管和腎小球排列整齊，足細胞結(jié)構(gòu)正常，內(nèi)皮細胞無水腫及變形，基底膜無增厚。
　　 輕度甲亢組仔鼠0天腎組織尚未發(fā)育完全，腎系膜細

14、胞及內(nèi)皮細胞較少，腎小球體積較小腎小管及腎小球排列整齊，與正常組0天腎組織無明顯差別。21天腎組織中腎小管及腎小球結(jié)構(gòu)稍紊亂，基底膜稍增厚，內(nèi)皮細胞無水腫等異常;60天腎組織纖維組織稍增生，纖維化較正常組同期明顯。內(nèi)皮細胞及系膜細胞水腫及體積增大。
　　 重度甲亢組仔鼠0天腎組織尚未發(fā)育完全，腎系膜細胞及內(nèi)皮細胞較少，腎小球體積較小，與正常組0天腎組織無明顯差別。21天腎組織排列異常紊亂，有大量紅細胞的浸潤，充血水腫較明顯，基底

15、膜增厚明顯，基質(zhì)增多。60天腎組織纖維組織明顯增生，纖維化明顯。內(nèi)皮細胞及系膜細胞水腫及體積增大大量炎性細胞的浸潤。
　　 7.仔鼠21天腎臟透射電鏡結(jié)果正常組21天仔鼠腎小球足細胞結(jié)構(gòu)排列完整，足突排列清晰整齊;輕度甲亢組21天仔鼠腎小球基底膜輕度增厚，且厚薄不均勻，毛細血管窗孔不均勻增大;重度甲亢組21天仔鼠腎臟足細胞明顯腫脹，足細胞線粒體鞘部分或大部分融合，部分膜融合或消失，系膜細胞和內(nèi)皮細胞腫脹明顯，系膜基質(zhì)增多，毛細血