腫瘤壞死因子-α、白介素-8和轉(zhuǎn)化生長因子-β-,1-對人胸膜間皮細胞表達水通道蛋白1的影響.pdf

1、本研究從病人漏出性胸腔積液中分離培養(yǎng)人胸膜間皮細胞,經(jīng)過免疫組織化學鑒定后,用MTT法研究腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β<,1>)對體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞的損傷作用的量效關(guān)系;用免疫印跡技術(shù)(Western blot)方法探討AQP<,1>的表達,并研究在TNF-α、IL-8和TGF-β作用下,培養(yǎng)人胸膜間皮細胞表達AQP<,1>的時相變化.從而為了解炎癥因子和AQP分子表達的關(guān)系,加深對

2、炎癥胸腔積液機制的認識,并為開發(fā)控制胸腔積液的藥物提供理論基礎.方法和結(jié)果:一.體外培養(yǎng)人胸膜間皮細胞的鑒定.在倒置相差顯微鏡下,體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞呈圓形、橢圓形、多邊形等,細胞生長融合后呈典型的卵石樣或鋪路石樣.細胞免疫熒光化學檢測顯示:體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞呈抗細胞角蛋白抗原陽性,抗波形蛋白抗原陽性,抗Ⅷ因子相關(guān)抗原陰性,符合人胸膜間皮細胞的特征.二.TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>對體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞存活率的

3、影響的量效關(guān)系.在10<'-8>~10<'-4>g/ml濃度范圍內(nèi),TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>對體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞存活有劑量依賴性抑制作用.其中,以TNF-α的量效曲線的斜率最大,IL-8的量效曲線的斜率最小.TNF-α抑制培養(yǎng)人胸膜間皮細胞的量效關(guān)系的回歸方程為:y=79.56-8.50x,r=0.9568,n=15;IL-8抑制培養(yǎng)人胸膜間皮細胞的量效關(guān)系的回歸方程為:y=96.86-4.081x,r=0.912

4、4,n=15;TGF-β<,1>抑制培養(yǎng)人胸膜間皮細胞的量效關(guān)系的回歸方程為:y=78.00-7.239x,r=0.9764,n=15.【y為培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞存活率﹪,x為細胞因子濃度(ng/ml)的對數(shù)值】三.培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞有AQP<,1>表達.Western blot顯示:AQP<,1>在SDS凝膠中的遷移率相當于分子質(zhì)量28kD(AQP<,1>的分子質(zhì)量).與同等量上樣蛋白的人胚腎細胞相比,人胸膜間皮細胞的AQP<,1>

5、表達量低于人胚腎細胞.四.炎癥細胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>增強培養(yǎng)人胸膜間皮細胞AQP<,1>表達的時-效關(guān)系Western blot顯示:在加入TNF-α、TGF-β<,1>或IL-8 0.5h人胸膜間皮細胞上AQP<,1>的表達即增加.此后加入TNF-α組的人胸膜間皮細胞上AQP<,1>的表達繼續(xù)增加,6h達到峰值;而加入TGF-β<,1>或IL-8組的人胸膜間皮細胞上AQP<,1>的表達均有所回降,其后再次增加

6、,在48h達到第二個更高的峰值.結(jié)論:1.人胸膜間皮細胞有AQP<,1>表達,與同等量上樣蛋白的人胚腎細胞相比,人胸膜間皮細胞的AQP<,1>表達低于人胚腎細胞.2.炎癥細胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>對培養(yǎng)的人胸膜間皮細胞存活有劑量依賴性的抑制作用,其中,以TNF-α的量效曲線的斜率最大,IL-8的量效曲線的斜率最小.3.炎癥細胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>可上調(diào)人胸膜間皮細胞AQP<,1>的表達.4.