七氟烷預(yù)處理聯(lián)合后處理對(duì)大鼠肺缺血再灌注損傷核轉(zhuǎn)錄因子κB表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討七氟烷預(yù)處理聯(lián)合后處理對(duì)大鼠肺缺血再灌注損傷核轉(zhuǎn)錄因子κB表達(dá)的影響，從而為七氟烷聯(lián)合作用的器官保護(hù)作用奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：選擇新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的健康、清潔級(jí)、雄性SD大鼠54只，體重在300～350 g之間，按照多個(gè)樣本均數(shù)比較的樣本含量計(jì)算公式估算出本研究所需大鼠共54只，每組18只。按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3組（n=18）：假手術(shù)組(S組)：大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉后仰臥位固定，游離右側(cè)頸總靜脈，行深

2、靜脈置管，并持續(xù)泵入0.9％氯化鈉注射液，同時(shí)游離大鼠氣管，行氣管切開(kāi)并進(jìn)行氣管插管，接小動(dòng)物呼吸機(jī)行機(jī)械通氣，通氣頻率65-70次/min，潮氣量10~15ml/kg，呼吸比1.0∶1.5。呼吸機(jī)的進(jìn)氣口與裝有七氟烷揮發(fā)罐的麻醉機(jī)呼吸回路末端相連。通氣30 min后，大鼠行右側(cè)臥位，并在大鼠左側(cè)第5肋間進(jìn)胸，應(yīng)用鈍性分離離斷左下肺韌帶，游離左肺門(mén)，并應(yīng)用在0.9％氯化鈉注射液中浸泡過(guò)的濕紗布覆蓋所暴露的肺組織制備S組模型；肺缺血再灌注

3、組(I/R組)：采用同S組模型同樣模型制備方法對(duì)大鼠肺組織進(jìn)行暴露，同時(shí)于頸總靜脈注射肝素鈉50 U進(jìn)行大鼠血液肝素化。注射肝素鈉5 min后，于大鼠呼氣末采用無(wú)創(chuàng)血管對(duì)所游離出的大鼠左肺門(mén)進(jìn)行夾閉，夾閉后進(jìn)行觀察，通氣時(shí)肺組織不再膨脹，顏色由淡紅色變?yōu)榘底霞t色，表明肺門(mén)阻斷成功。在大鼠肺門(mén)阻斷45 min后，松開(kāi)血管鉗恢復(fù)大鼠肺組織的血液循環(huán)和通氣，形成肺組織的再灌注，并進(jìn)行觀察。5min內(nèi)大鼠肺組織與通氣時(shí)膨脹，且肺組織顏色逐漸恢復(fù)

4、成再灌注之前的顏色，表明大鼠肺組織的再灌注成功，大鼠肺組織再灌注的模型制備成功；七氟烷預(yù)處理聯(lián)合后處理組(SP組)：在對(duì)大鼠左肺門(mén)進(jìn)行阻斷前前吸入2.1％七氟烷30 min，洗脫10 min，然后阻斷左肺門(mén)45 min，并于形成再灌注的即刻再次吸入七氟烷30min，以此制備七氟烷聯(lián)合處理組的模型。并分別于再灌注30、60和120 min時(shí)隨機(jī)處死6只大鼠，取大鼠肺組織，測(cè)定大鼠肺組織濕重/干重比值(W/D比值)，采用ELISA法測(cè)定大鼠

5、肺組織TNF-α含量，采用RT-PCR法測(cè)定大鼠肺組織NF--κB p65 mRNA的表達(dá)并采用Western blot法測(cè)定核蛋白NF-κB活性的表達(dá)，同時(shí)光鏡下觀察肺組織病理學(xué)結(jié)果，對(duì)大鼠肺組織損傷情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：與S組比較，I/R組和SP組再灌注各時(shí)點(diǎn)肺組織W/D比值、TNF-α含量、NF--κB p65 mRNA及NF-κB活性均升高(P<0.05)；與I/R組比較，SP組再灌注各時(shí)點(diǎn)肺組織W/D比值、TNF-α