缺血預(yù)處理、缺血后處理和烏司他丁對大鼠腎缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：建立大鼠腎臟缺血再灌注(I/R)損傷模型；觀察缺血預(yù)處理(IP)、缺血后處理(IPo)、烏司他丁預(yù)先給藥(U)及烏司他丁預(yù)先給藥聯(lián)合缺血后處理(U+IPo)對大鼠腎I/R損傷的影響，并探討其機(jī)制。 方法：36只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組(n=6)，假手術(shù)組(S組)，缺血再灌注組(I/R組)，缺血預(yù)處理組(IP組)，缺血后處理組(IPo組)，烏司他丁組(U組)和烏司他丁聯(lián)合缺血后處理組(U+IPo)。10％水合氯醛3 ml·k

2、g<'-1>腹腔注射麻醉，采用夾閉雙側(cè)腎蒂45 min、再灌注6 h制備腎臟I/R模型，用無損傷動脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂，腎臟顏色變?yōu)榘导t色即可確認(rèn)腎臟血流阻斷，造成雙側(cè)腎缺血45 min后，松開動脈夾，腎臟由暗紅色恢復(fù)鮮紅色即可確認(rèn)血流恢復(fù)，夾閉和放開腎蒂時腹腔內(nèi)各注射林格液20 ml·kg<'-1>。S組僅行開腹，游離出雙側(cè)腎臟，分離雙側(cè)腎蒂不夾閉，傷口用生理鹽水紗布覆蓋，暴露45 min不作腎缺血處理； I/R組夾閉雙側(cè)腎蒂，缺血45m

3、in后放開動脈夾；IP組在45 min持續(xù)缺血前先給予夾閉雙側(cè)腎蒂缺血5 min，再灌注5 min，反復(fù)3次，余操作同I/R組；IPo組在夾閉雙側(cè)腎蒂45 min后，再灌注10 s，缺血10 s，反復(fù)3次后，完全恢復(fù)腎臟血流；U組在缺血前30 min經(jīng)尾靜脈注射烏司他丁2×10<'4>U·kg<'-1>，余操作同I/R組； U+IPo組在缺血前30 min經(jīng)尾靜脈注射烏司他丁2×10<'4>U·kg<'-1>，余操作同IPo組。再灌注6

4、 h時再次將大鼠麻醉，迅速開胸心臟取血處死動物。酶法測定血清肌酐(Cr)含量、苦味酸不除蛋白法測定尿素氮(BUN)含量和終點(diǎn)法測定尿酸(UA)的濃度；放射免疫分析法測定尿α 1-微球蛋白(α 1-MG)和β 2-微球蛋白(β 2-MG)的含量；硫代巴比妥酸(TBA)法測定腎組織中丙二醛(MDA)含量和黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性；采用逆轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測腎組織Bcl-2 mRNA和Bax mRNA

5、表達(dá)，表達(dá)水平以與其相應(yīng)的內(nèi)參β-actin的光密度比表示；原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL)法檢測腎組織中凋亡細(xì)胞，計算腎小管上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)；采用免疫組化(SP)法觀察腎組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)，計算蛋白陽性染色指數(shù)(PI)；蘇木素．伊紅(HE)染色，在光鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化。 結(jié)論: 1.缺血預(yù)處理、缺血后處理，烏司他丁預(yù)先給藥及烏司他丁聯(lián)合缺血后處理均可減輕大鼠腎I/R損傷